1. 裸鼠在戊巴比妥钠( 30 mg/ kg ) 静脉注射麻醉下, 取左上腹横切口, 暴露肝脏, 切开肝左叶被膜, 将2 块1 mm x1 mm x1 mm 瘤组织块植入肝实质内,10-0 无损伤线缝合肝被膜,7-0 丝线缝合腹膜, 5-0 丝线缝皮。
2. 术后,继续饲养, 逐日观察肿瘤生长情况。
1. 当荷瘤裸鼠处于濒死状态时,取其中一只荷瘤裸鼠用颈椎脱位术处死, 系统解剖,取出移植瘤。
2. 取出的移植瘤一部分瘤组织以原代移植方法行鼠间连续传代, 每次传代裸鼠5~10 只不等; 另一部分瘤组织液氮冻存备用,并被用做相关指标检测。
3. 其他荷瘤裸鼠饲养至濒死状态或自然死亡,以观察其肿瘤的生长、侵袭和转移。
七、 观察项目
1. 解剖学和组织学检查
(1)全部被处死和自然死亡的荷瘤裸鼠均经详细解剖学检查, 并记录肝内肿瘤,皮下移植瘤生长情况。
(2)淋巴结取材包括:髂动脉旁、髂动脉间、纵隔、肠系膜、幽门、贲门和肝门淋巴结等; 肺、肝、脾、肾、脑等器官常规取材,所有组织均经10% 中性甲醛固定, 石蜡切片,苏木精、伊红( H E) 染色, 光镜观察。
2. 免疫组织化学染色
采用LSAB 法,对全部裸鼠肝肿瘤切片用CD3、CD7、CD19、CD20、CD45RO、CD79a 抗体进行免疫组织化学染
色,所用试剂均购自DaKo 公司。
3. 电镜观察
移植瘤组织以2. 5% 戊二醛和1% 锇酸双固定, Epon-812 包埋, 超薄切片,铀- 铅染色,PHILIPS-CM10透射电镜观察。
4. 实验室检查
AFP 放免法; 乙肝标志:HBsAg、HBeAg、HBsAb、HBeAb、HBcAgELISA 法; LDH-L 法。
5. 流式细胞分析
采用美国FACS-420型流式细胞仪, 对正常肝细胞、瘤源标本、移植瘤细胞进行DNA 含量测定。
6. 染色体检查
采用短期培养,不加有丝分裂刺激方法,收获细胞常规制片,GTG 法染色,显微镜下观察。
7. 恶性淋巴瘤组织学分类标准
采用2001 年新的WHO 分类方法。
8. 统计学处理
差异显著性采用t 检验, 数据以以x±s 表示,在SPSS10. 0 统计软件上完成。