关键词: 叶绿体 等渗溶液 沉降速率
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实验原理
组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法.一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状、密度、离心力及介质黏度等.
同一离心场中,同一时间内,密度和大小不同的颗粒沉降速率不同.依次增加离心力和离心时间,就能使非均一的悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部,从而可分批收集各种亚细胞成分. 在等渗溶液中将叶绿体匀浆液在1000 r/min的条件下离心2 min,去除其中的组织残渣和未破碎细胞,再在3000 r/min的条件下离心5 min,即得沉淀的叶绿体. 实验用品
1 器材
离心机、组织捣碎机、显微镜、天平、离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、盖玻片
2 材料
新鲜菠菜 3 试剂
0.35 mol/L氯化钠溶液 实验方法
(一)叶绿体的分离与观察
1 取新嫩菠菜叶,洗净檫干后去除叶梗和粗脉,称30 g于150 ml 0.35mol/L氯化钠溶液中,装入组织捣碎机;
2 利用组织捣碎机低速匀浆3-5 min;
3 将匀浆用6层纱布过滤于500 ml烧杯中;
4 取滤液4ml在1000 r/min下离心2 min,取上清;
5 上清液3000 r/min,离心5 min.去上清,沉淀即为叶绿体;
6 0.35 mol/L氯化钠溶液悬浮沉淀;
7取叶绿体悬液1滴于载玻片上,加盖片:普通光镜下观察;
(二)菠菜叶徒手切片观察
新嫩菠菜叶斜切面1片
0.35 mol/L氯化钠溶液1滴
加盖片轻压:光镜下观察;
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