慢病毒包装流程

慢病毒包装流程，简单说就是：把三质粒共转染到293T细胞里，让细胞产出携带目的基因的慢病毒颗粒，再收集病毒上清。

核心流程分五步：

1. 准备包装细胞。293T细胞状态要好，传代次数别太高，转染时密度控制在70%-90%汇合度。

2. 三质粒共转染。转移质粒携带目的基因，包装质粒提供Gag/Pol等结构蛋白，包膜质粒常用VSV-G。常用比例参考4:3:1，具体按体系微调。质粒必须用去内毒素的高纯度质粒。

3. 换液与收毒。转染后6-12小时换新鲜培养基，转染后48小时和72小时分别收集病毒上清。

4. 浓缩与分装。低速离心去除细胞碎片，可用超速离心或PEG浓缩提高滴度，然后分装冻存于-80℃，避免反复冻融。

5. 滴度检测。常用qPCR或功能滴度测定，确认病毒滴度后再用于感染目标细胞。

常见翻车点：质粒纯度不够、293T状态差、三质粒比例不对、插入片段超过8-9 kb、收毒时间太晚。慢病毒包装对质粒质量和细胞状态要求都很高。

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