- 讲师介绍
- 视频介绍
讲师介绍
淼灵质粒平台
淼灵质粒平台
视频介绍
做克隆最怕什么？载体选好了，引物设计好了，结果在SnapGene里模拟克隆时阅读框错了，白忙两周。今天淼灵小课堂的师姐手把手演示，如何用SnapGene把目的基因“装”进载体，并检查阅读框，一次学会。
第一步：准备载体和基因文件。载体骨架可以从实验室共享文件夹或SnapGene官网下载，打开后看到环状图谱。目的基因的CDS序列复制粘贴成新文件，命名如EGFP_CDS。先找多克隆位点（MCS），浅灰色背景区域，里面排列着各种酶切位点。
第二步：模拟双酶切。以EcoRI和XbaI为例，按住Shift依次单击两个位点，点击Actions → Restriction Cloning → Insert Fragment，选择目的基因文件，两端分别选择EcoRI和XbaI，点击Clone。SnapGene自动生成重组质粒。如果方向反了，勾选Reverse orientation重新克隆。
第三步：检查阅读框，这一步绝对不能省。DNA每三个碱基编码一个氨基酸，目的基因和标签之间的碱基数必须是3的倍数，否则移码，蛋白全错。切换到Sequence视图，找到连接处，看起始密码子ATG是否落在框的开头。更简单的方法：Tools → Find Open Reading Frames，自动标注所有阅读框。如果阅读框错了，要么重新设计引物，要么重新选位点或用无缝克隆。
第四步：保存和输出。确认无误后，File → Save As保存重组质粒。导出引物：Primers → Add Primer，或File → Export → Primers。
总结：SnapGene模拟克隆三步——打开载体和基因文件、选酶切位点、点击Clone，然后务必检查阅读框。下一期讲如何根据图谱设计引物序列。需要载体或克隆服务，欢迎咨询淼灵生物。
