细胞是如何冻存的?

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百奥思科(MDL)市场技术团队制作
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取培养基到50微升离心管中,并取90%FBS,10%DMSO,必须缓缓加入培养基,混合均匀。取少量细胞液置于离心管中,吸取细胞液前,先混合均匀,保存于冷冻盒,移植-80度冰箱,隔日,将细胞冷冻管置于冷冻夹上,迅速移入液态氮桶中即可。

注意:细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻,细胞内外的水分会很快形成冰晶,从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度增高,pH值改变,部分蛋白质由于上述原因而变性,引起细胞内部空间结构紊乱,溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶,使细胞内结构成分造成破坏,线粒体肿胀,功能丢失,并造成能量代谢障碍。胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引起细胞膜通透性的改变,使细胞内容物丢失。如果细胞内冰晶形成较多,随冷冻温度的降低,冰晶体积膨胀造成细胞核DNA空间构型发生不可逆的损伤,而致细胞死亡。