单克隆抗体药物质量控制及HPLC分析技术

Protein C4色谱柱对抗体木瓜蛋白酶消化物的分析

   2014-08-19
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对于不同来源的IgG,通过木瓜蛋白酶消化分离其Fab 片段与Fc 片段,用SEC 色谱柱将分子50000 左右及分子量100000 左右的组分进行分离,对获得的组分再分别使用TSKgel Protein C4-300进行分析。分子量50000 的组分中,推测含有Fab 片段与Fc 片段,再次使用TSKgel Protein C4-300分析(RPC)时,分离出了5 个吸收峰。推测该IgG的氨基酸序列或糖链结构存在不均一性。

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色谱条件
色谱柱 : TSKgel SuperSW3000 (4.6 mm I.D. X 30 cm)
流动相 : 0.2 mol/L 磷酸缓冲液 + 0.05 % NaN3 (pH6.7)
流速 : 0.35mL/min
检测 : UV (280nm)
温度 : 25℃
进样体积 : 100 μL
样品 : 单克隆抗体IgG(小鼠)的木瓜蛋白酶消化物

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色谱条件
色谱柱 : TSKgel Protein C4-300 (4.6 mm I.D. X 15 cm)
流动相 :
A: H2O / CH3CN / TFA = 90 / 10 / 0.05 (v / v / v)
B: H2O / CH3CN / TFA = 20 / 80 / 0.05 (v / v / v)
A→B 线性梯度(45 min)
流速 : 1.0 mL/min
检测 : UV (215nm)
温度 : 50 ℃
进样体积 : 100 μL
样品 : SEC 法分离出的组分1,2

编辑: gaowei2010    来源:丁香园