CM-STAT色谱柱对治疗性抗体药物异构体的分析（2）
在人IgG1 的C 末端通常具有精氨酸或赖氨酸的结构，某些时候会因为精氨酸或赖氨酸的缺失而出现异构体。
使用羧肽酶B 处理抗体样品，C 末端的赖氨酸结构可以被去除。在本数据中，介绍了一款高分辨率、非多孔、适合于抗体异构体分析的弱阳离子交换色谱柱TSKgel CM-STAT 分析一种市售治疗性抗体药物（已知含有C末端赖氨酸缺失型异构体）的应用。从分析谱图中可以看出，未经羧肽酶B 处理的抗体样品出现了3 个主要色谱峰。经过羧肽酶B 处理后，由于C 末端赖氨酸被除去，3 个色谱峰变成了1 个主要色谱峰。
色谱条件
色谱柱 : TSKgel CM-STAT (4.6mmI.D. x 10cm)
流动相 :
A ; 20mmol/L MES (pH6.0)
B ; 20mmol/L MES + 500mmol/L NaCl (pH6.0)
梯度 :
0min 10% B
15min 30% B
15.1min 100% B
18min 100% B
18.1min 10% B
23min 10% B
流速 : 1.0mL/min
检测 : UV (280nm)
温度 : 25C
进样体积 : 20μL
样品浓度 :0.5g/L
样品 : 经羧肽酶 经羧肽酶 经羧肽酶 经羧肽酶 B处
液相色谱仪 : Agilent 1120 Compact LC (gradient auto system)
程序：
在35uL的治疗性抗体 (10mg/mL)中加入1uL的羧肽酶 B(Sigma C9584, 140U/mg protein, 5g/L in PBS)，37度下孵化 3个小时。然后加入664uL的20mmol的ME(pH6.0)以将抗体样品浓度稀释至0.5g/L。最后取20uL的稀释样品进样。