低血清MEM培养基低血清培养BHK-21细胞程序
传代种细胞选择标准
应选择形态良好、正常健康、分布均匀的细胞瓶细胞。
应选择形成单层或致密单层的处于对数生长期的细胞瓶细胞。
应选择培养液pH大于6.8～7.0的细胞瓶细胞。
细胞消化
细胞消化液为含0.25％胰蛋白酶和0.025％EDTA消化液，建议使用Hanks’液或PBS溶液配制，pH为7.6～7.8。细胞消化配制后应及时使用。
将细胞生长良好的培养瓶，轻微摇瓶后倒去细胞培养液，加入适量细胞消化液，转动细胞瓶使细胞消化液浸润细胞1～3分种，倒去细胞消化液，静止细胞瓶待细胞滑落，加入细胞培养液，摇瓶分散细胞。
细胞分种、细胞培养
按1:6～1:9分种比例分种细胞。选择合适的分种比例，应控制分种后培养1天时细胞汇合率为40％～80％为宜。
细胞培养液使用血清含量为4～5％。
15L转瓶细胞培养液加量为2～2.5L。
15L转瓶细胞培养温度为37±0.5℃，转数10～12rpm。
细胞培养时间为2天，细胞应生长为致密单层，pH应大于6.8～7.0。
当细胞生长为致密单层后应及时传代。
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