反应器中悬浮培养的BHK21 细胞
650L 反应器悬浮培养 BHK21 细胞生产兽用狂犬病毒技术
——适应于 BHK21 的 Flury 或 ERA 毒株
一、技术背景
BHK21 细胞是繁殖狂犬病毒的适合宿主。我国公布的《狂犬病活疫苗（Flury 株）制造及检验试行规程》，以及法国维克公司在我国注册的犬/猫用狂犬病灭 活疫苗都是采用 BHK21 细胞。
目前，国内 BHK21 生产兽用狂犬疫苗生产工艺是用传统的转瓶培养 BHK21 细胞工艺，即将狂犬病毒株（Flury 株等）接种单层生长的 BHK21 细胞，维持培 养 4～5 日，一次性收获、冻融，制备成苗。因每个转瓶均是独立的细胞培养单 元，每瓶的细胞质量、病毒产量和滴度都不同，导致国产狂犬疫苗批间差大，隐 性污染引起高内毒素等缺点。
反应器悬浮培养 BHK21 细胞生产兽用狂犬病毒工艺，不仅能提高 BHK21 细 胞密度，自动监控细胞生长或病毒繁殖时的最适生化条件，提高病毒滴度，而且 工艺规模放大相对容易，疫苗质量稳定、批间小。该工艺将改变目前国产兽用狂 犬疫苗价廉质低的形象。
北京天和瑞生物科技有限公司携手北京清大天一生物技术有限公司，已成 功开发了 BHK21 反应器悬浮培养基、120L-650L-1200L 反应器悬浮 BHK21 细胞技 术、650L 反应器悬浮培养 BHK21 细胞生产兽用狂犬病毒工艺等关键技术，为反 应器生产兽用狂犬病毒疫苗的产业化奠定了扎实的技术基础。
二、工艺技术
650L 反应器悬浮培养 BHK21 细胞生产兽用狂犬病毒工艺：利用 BHK21 悬浮 培养基从液氮中复苏已适应悬浮培养的 BHK21 细胞株，种子细胞经摇瓶、5L 反 应器和 120L 反应器等逐级放大培养，最后在 650L 反应器中悬浮培养 BHK21 细胞 至合适密度，接种狂犬病毒种毒，维持一定的溶氧、pH 值、温度等工艺参数， 适时收获狂犬病毒上清,制备成疫苗。反应器收获的狂犬病毒滴度高于转瓶培养 病毒的滴度。
图 1 表示了反应器悬浮培养 BHK21 细胞的照片，细胞密度可以达到 3×106cells/ml 左右以上。
图1 反应器中悬浮培养的BHK21 细胞，200X
三、工艺流程
四、项目技术资料
1. 650L 反应器悬浮培养 BHK21 细胞生产兽用狂犬病毒总结报告
2. 650L 反应器悬浮培养 BHK21 细胞生产兽用狂犬病毒工艺规程
3. 5L 反应器悬浮培养 BHK21 细胞操作规程
4. 120L 反应器悬浮培养 BHK21 细胞操作规程
5. 650L 反应器悬浮培养 BHK21 细胞操作规程
6. 650L 反应器悬浮培养 BHK21 细胞生产兽用狂犬病毒操作规程
7. 650L 反应器悬浮培养 BHK21 细胞生产兽用狂犬病毒技术要点
8. 各级反应器细胞培养记录
9. 650L 反应器病毒培养记录
默克密理博北京清大天一细胞培养基的研发、制造适应了疫苗、抗体药物行业的技术发展需要和生产需要，细胞培养基产品和业务包括无血清培养基、低血清培养基、反应器悬浮培养基等个性化细胞培养基，基础细胞培养基，以及客户定制细胞培养基服务。