120L反应器微载体培养Vero细胞制备甲肝病毒技术
120L 反应器微载体培养 Vero 细胞制备甲肝病毒技术
一、技术背景
国际上普遍使用甲肝灭活疫苗。目前，我国使用甲肝减毒活疫苗，尚未有 灭活甲肝疫苗上市。我国生产甲型肝炎病毒疫苗的细胞基质是人二倍体细胞和 Vero细胞，都采用转瓶细胞培养工艺，细胞培养密度低，抗原含量也低。由于甲 肝灭活疫苗使用的抗原量远大于减毒活疫苗，传统的转瓶培养方法难以满足生产 需要。同时，每个转瓶都是独立的细胞培养单元，每瓶的细胞质量和病毒产量都 不同，导致疫苗批间差大，隐性污染引起高内毒素等缺点，而且劳动强度大，生 产效率低。
反应器微载体培养 Vero 细胞生产甲肝病毒工艺，不仅能自动监控细胞生长 或病毒繁殖时的最适生化条件，提高 Vero 细胞密度和病毒滴度，而且良好的过 程控制和操作程序使得疫苗质量稳定、批间小。
北京天和瑞生物科技有限公司携手北京清大天一生物技术有限公司，已成 功开发了反应器微载体培养Vero细胞专用培养基、120L反应器微载体高密度培 养Vero细胞技术、120L反应器微载体培养Vero细胞生产甲肝病毒工艺等产业化 关键技术，为该甲肝灭活疫苗项目的产业化实施奠定了良好的基础。
二、工艺技术
120L 反应器微载体培养 Vero 细胞生产甲肝灭活病毒工艺：将种子批 Vero 细胞从液氮中复苏，分别经方瓶、转瓶或小反应器的扩增培养，消化转瓶细胞或 者小反应器微载体细胞（球转球微载体工艺放大技术），接种至 120L 反应器， 控制一定的溶氧、pH 值、温度等参数进行细胞培养。待 Vero 细胞生长至合适密 度，接种甲肝病毒，控制温度、溶氧、pH 值和灌注速率等工艺参数，连续培养 二十天左右，收获并破碎细胞，纯化制苗。
图1 表示了 120L 反应器微载体培养 Vero 细胞的照片，微载体培养的 Vero 细胞密度 3-5×106cells/ml，使用维持液的血清量低于 2％，连续维持 20-25 天，单位细胞（例如 107cells 为基准）的甲肝抗原量高于转瓶培养的抗原量。
图1 120L反应器微载体培养Vero细胞照片
三、工艺流程
四、项目技术资料
1. 120L反应器微载体培养Vero细胞生产甲肝病毒工艺总结报告
2. 120反应器微载体培养Vero细胞生产甲肝病毒工艺操作规程
3. 120L反应器微载体培养Vero细胞生产甲肝病毒工艺技术要点
4. 120L反应器细胞培养操作记录
5. 120L反应器病毒培养操作记录
6. 病毒检测报告
默克密理博北京清大天一细胞培养基的研发、制造适应了疫苗、抗体药物行业的技术发展需要和生产需要，细胞培养基产品和业务包括无血清培养基、低血清培养基、反应器悬浮培养基等个性化细胞培养基，基础细胞培养基，以及客户定制细胞培养基服务。