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iTraq\TMT标记技术

   2015-03-17
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定量蛋白质组学(Quantitative Proteomics)是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行精确鉴定和定量。可用于筛选和寻找任何因素引起的样本之间的差异表达蛋白,结合生物信息学揭示细胞生理病理功能,同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。

    
iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术。该技术利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。

  
TMT标记 同量异序化学标签是通过串联质谱对不同样品中的蛋白进行同时鉴定和定量的有力工具。这些标签是具有相同结构的小化学分子,这些标签能够共价地结合在蛋白和 多肽的赖氨酸残基的游离氨基末端,因此能够标记样品中的多种多肽。在MS/MS分析中,每个同量异序标签都能够产生一个独特的离子图谱,因此可以利用该标 签进行定量。在第一次MS分析中,标记的多肽是无法彼此区分出来的;然而,在串联MS 模式下,多肽会被分离并片段化,每个标签都会产生一个独特的报告离子。通过比较MS/MS图谱中的六个报告离子的强度就可以对蛋白进行定量。

TMT/iTRAQ标记蛋白质组学实验流程

蛋白3.png
技术特点
定量精确:每组平行比较多达8个样本,标记效率高达97%,可减少样本处理、以及不同组上机造成的实验误差。
高效率样品分离:进行SCX-HPLC分离,实现自动化操作。
高鉴定率:系统全面地研究组织或细胞中尽可能多的蛋白质,可鉴定多达6000种蛋白。
适用范围广:无物种特异性限制,理论上可用于所有物种。
仪器性能优良:基于高分辨率(大于105)、高质量精度(小于1ppm)质谱平台,可获得更加准确的结果。

信息分析内容

数据产出统计

蛋白质Pathway代谢通路分析

蛋白质鉴定结果

差异蛋白GO富集分析

蛋白质定量结

差异蛋白的Pathway富集分析

蛋白质GO分析

重复性分析(仅针对有重复设计的项目)


技术流程

蛋白4.png

样本要求

新鲜动物组织

植物

微生物

细胞

血液

唾液、羊水、脑脊液等体液

尿液

蛋白

干重≥100mg

湿重≥5g

≥200mg

≥3-5×106,细胞沉淀体积约30-50µl

血清/血浆≥500µl,全血≥2ml

≥2ml

≥50ml

≥500µg,浓度≥1µg/µl


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编辑: weicf    来源:丁香园

北京毅新博创生物科技有限公司成立于2008年,由国家“千人计划”张教授领军,组建了包括多名海归博士的科研团队。毅新博创为国家火炬高新技术企业、北京市高新技术企业和北京科技研究开发机构。2013年8月,毅新博创和中国人民解放军总医院、美国约翰霍普金斯大学、美国斯坦福大学合作成立“北京市临床质谱国际科技合作基地”,并于2014年6月被挂牌为中关村开放实验室“生物质谱转化医学研究中心”。

 

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