大鼠血管生成素1(ANG-1)检测试剂盒优惠价

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括大鼠血管生成素1(ANG-1)检测试剂盒优惠价在内的一系列ELISA试剂盒产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：大鼠血管生成素1(ANG-1)检测试剂盒优惠价
编号：ZN2902
规格：96T
英文名：Rat Angiopoietin 1 ELISA Kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法，用于体外定量分析大鼠血清、血浆、细胞裂解液或细胞培养上清中ANG-1的含量。预先包被的抗体和检测相克隆抗体都是亲和纯化的ANG-1多克隆抗体。检测相抗体经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠ANG-1呈正相关。

ANG-1和ANG-2是二个密切相关的Tie-2配体。具有酪*酸受体激酶的活性。有球蛋白和EGF的同源区。Tie-2和其配体在胚胎血管生成和成熟血管的维持过程中起重要作用。

检测指标：Angiopoietin-1；ANG1；ANG-1
检测范围：156pg/ml～10000pg/ml
特异性：系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性：＜10pg/ml

产品组成：

 

组分	规格	数量
预包被抗大鼠ANG-1抗体的96孔板	96T	1板
重组大鼠ANG-1标准品(冻干)	10ng/管	2管
生物素标记抗大鼠ANG-1(100X)	130μl	1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)	130μl	1管
样品稀释液	30ml	1瓶
抗体稀释液	12ml	1瓶
ABC稀释液	12ml	1瓶
TMB显色液	10ml	1瓶
TMB终止液	10ml	1瓶
洗涤缓冲液(25X)	20ml	1瓶
封板膜		4张

储存条件：2-8℃（频繁使用时），-20℃（长时间不用时）
有效期： 6个月(4℃)；12个月（-20℃）

需自备的仪器和试剂：
1．标准规格酶标仪。
2．自动洗板机。
3．恒温箱
4．系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器。
5．干净的试管和Eppendof管。
6．用去离子水将25X洗涤缓冲液稀释25倍，成1X洗涤缓冲液。

样品的准备和保存：
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
细胞培养上清：离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
血清：用干净试管收集血液，室温凝固30分钟，1500×g离心15分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
血浆：采用肝素或EDTA抗凝，抽血后30分钟内在2-8℃温度下，1500×g离心15分钟。为消除血小板的影响，建议在2-8℃进一步10000×g离心10分钟。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞裂解液：对于贴壁细胞，去除培养液，PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常10秒后，细胞就会被裂解。对于悬浮细胞，离心收集细胞，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打把细胞吹散，用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

注意事项：
1．使用前TMB显色液应为无色透明溶液，若发现颜色异常，请及时与我司联*(代"系")。
2．用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
3．要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。
4．为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
5．禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。
6．本公司提供的96孔酶标板是单条可拆型酶标板，用户可按需求使用，剩余的酶标板请按保存条件贮存。
7．揭封板膜和覆盖封板膜时应避免用力过大导致液体溅出。

参考标准曲线数据：(取自某一批次质检数据，仅供参考，用户需要自己建立标准曲线)

浓度(pg/ml)	0	156	313	625	1250	2500	5000	10,000
OD值	0.151	0.192	0.247	0.329	0.522	0.868	1.421	2.159

关于大鼠血管生成素1(ANG-1)检测试剂盒优惠价的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
ZN2383 人糖基化终产物受体(RAGE)检测试剂盒(ELISA方法) Human Receptor for Advanced Glycation Endproducts ELISA Kit
ZN2063 人趋化因子CCL15检测试剂盒(ELISA方法) Human C-C motif chemokine 15 ELISA Kit
ZN2660 小鼠白介素20(IL-20)检测试剂盒 Mouse Interleukin-20 ELISA Kit
ZN2340 人神经调节蛋白1(Neuregulin-1)检测试剂盒(ELISA方法) Human Neuregulin 1 ELISA Kit
ZN2458 人Toll样受体2(TLR2)检测试剂盒(ELISA方法) Human Toll-like receptor 2 ELISA Kit
ZN2138 人NBL1(DAN)ELISA试剂盒 Human Neuroblastoma suppressor of tumorigenicity 1 ELISA Kit
ZN2735 小鼠血小板源性生长因子(PDGF-AB)检测试剂盒 Mouse platelet-derived growth factor ELISA Kit
ZN2853 大鼠生长分化因子5(GDF-5)检测试剂盒 Rat Growth differentiation factor 5 ELISA Kit
ZN2533 小鼠趋化因子CCL17检测试剂盒(ELISA方法) Mouse Chemokine(C-C motif) ligand 17 ELISA Kit
ZN2213 人血红素结合蛋白(HPX)检测试剂盒(ELISA方法) Human Hemopexin ELISA Kit
ZN2810 小鼠Wnt抑制因子1(WIF-1)检测试剂盒 Mouse Wnt inhibitory factor 1 ELISA Kit
ZN2010 人ADAMTS1检测试剂盒(ELISA方法) Human A Disintegrin-Like and Metalloproteinase with Thrombospondin Type 1 Motif 1 ELISA Kit
ZN2607 小鼠肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)检测试剂盒 Mouse Intestinal-type fatty acid-binding protein  ELISA Kit
ZN2287 人干细胞因子受体(SCFR)检测试剂盒(ELISA方法) Human Mast/stem cell growth factor receptor Kit ELISA Kit
ZN2884 大鼠神经营养因子3(NT-3)检测试剂盒 Rat Neurotrophin 3 ELISA Kit
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·细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)
编号：ZN1526
规格：20T
保存条件：-20℃冰冻保存一年。
工作原理：
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或 DNA 被切割，出现单链或双链缺口，并产生与 DNA 断点数目相同的3’-OH 末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将地高*(代"辛")标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至 3’-OH 末端，DIG-dUTP 结合在 DNA 断点部位，可以通过生物标记的抗地高*(代"辛")抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后，再结合链酶亲和素-荧光素 FITC(SABC-FITC)。FITC 在 490-495nm 激化，在 520-530nm 发射荧光，呈黄绿色。凋亡的细包核呈黄绿色，从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。
试剂盒内容：
1．标记缓冲液(Labeling Buffer)1ml
2．末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl
3．DIG-dUTP(×20)20μl
4．封闭液(Blocking Reagent)4ml
5．生物素化抗地高*(代"辛")抗体(× 100)20μl
6．SABC-FITC(× 100)20μl
7．Proteinase K(×200)50μl
8．抗体稀释液 4ml
阳性对照片2张
用户自备试剂：
1．多聚赖*酸或APES。
2．0.01M TBS,PH7.5(配法:1L 双蒸馏水中加入 8.5 克*化*,1.2 克 Tris和 0.45—0.5ml 纯乙酸。)
3．DAPI 染色液
4．水溶性封片剂或抗荧光衰减封片剂。
操作步骤：
1．样品处理
(1)玻片预先用多聚赖*酸或 APES 进行处理。
(2)细胞涂片和冰冻切片：最重要的是及时固定。用 4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0---7.6)室温下固定 30—60分钟。0.01M PBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤 2分钟×2次。
(3)组织：有条件时应及时固定。常规 4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0---7.6)或 10%中性缓冲福尔马林固定 4 小时以上，石蜡包埋。切片常规脱蜡入水(脱蜡务必干净)。
2．标本片加 0.01M TBS 1:200 新鲜稀释 Proteinase K 37℃消化 1—15分钟,0.01M TBS洗2分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或消化 10—60秒钟。新鲜石蜡切片消化 5-10分钟。陈旧石蜡切片消化 10-15分钟)。
3．标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer)20μl/片,以保持切片湿润。按每张切片取 TdT和 DIG-d-UTP 各 1μl，加入 18μl标记缓冲液中，混匀。甩去切片上多余液体后加标记液，20μl/片。置样品于湿盒中，37℃标记2 小时。
4．0.01M TBS洗2分钟×3次。
5．加封闭液 50μl/片，室温 30分钟，甩掉封闭液，不洗。
6．用抗体稀释液 1：100 稀释生物素化抗地高*(代"辛")抗体：(取1ml抗体稀释液加生物素化抗地高*(代"辛")抗体10μl)，混匀后 50μl/片加至标本片上。置样品于湿盒中，37℃反应30分钟。
0.01M TBS洗2分钟×3次。
7．用抗体稀释液 1：100 稀释 SABC：取 1ml 抗体稀释液加 SABC 10μl，混匀后 50μl/片加至切片。37℃反应 30分钟。0.01M TBS洗5分钟×4次。
8．必要时可用DAPI染色液轻度复染，蒸馏水洗。抗荧光衰减封片剂封片(可用甘油代替)。荧光显微镜观察。
结果判定：
细胞核中有黄绿色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的细胞。
注意事项：
1．试剂盒严格-20℃存放。
2．初用时如试管底部无可见的试剂，在离心机离心5分钟，使试剂沉至管底。
3．检测过程中切勿使样品干涸。


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·ThymosinB15 mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN1389
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.ThymosinB15 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
ThymosinB15的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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