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石蜡包埋组织RNA提取试剂盒说明书 产品编号:BTN81102 规格:30T 产品及特点: 石蜡包埋组织本是珍贵的分子生物学研究材料,但是由于它们的保存时间一般都比较长,很不容易从中提取到可以进行PCR的RNA,存在的主要问题是RNA的降解和脱蜡过程中样品的丢失。本产品是专门用于从甲醛和非甲醛固定的石蜡包埋组织中快提RNA的试剂,具有下列特点: 1. 一管式操作,避免了可能的交叉污染和样品RNA的丢失。 2. 含一步离心式脱蜡试剂,不需要使用有毒的二甲苯,健康环保。 3. 能有效去除基因组DNA的污染,得到的RNA可直接用于RT-PCR反应。 4. 即开即用,客户自己不需要准备额外的试剂。 规格及成分:
低温运输,4℃保存(溶液C需要-20℃放置),有效期一年。 自备试剂: 氯仿、75%乙醇。 使用方法: 1. 将5片厚度为6-8μM的石蜡包埋组织切片转移到1.5mL塑料离心管(最好使用螺旋盖离心管)中并加入1mL溶液A,在振荡器上以最大速度振荡10秒。 2. 加入75μL溶液B,在振荡器上以最大速度振荡10秒。 3. 7000×g室温离心2分钟,溶液将形成两个相,其中组织切片位于下相。 4. 小心吸弃上层液体。 5. 将离心管放入真空离心机中抽干下层的液体,一般需要一小时。 6. 加入150μL溶液C,55℃保温过夜。 7. 短暂离心,95℃保温10分钟。 8. 加入0.5mL溶液D,充分震荡半分钟。 9. 加入0.1mL自备氯仿,振荡器上充分振荡混均30秒。 10. 13000-5000×g室温离心3-5分钟。 11. 将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中。下层有机相(蓝色)和中间层含有DNA和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见,可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行,否则容易吸出交界面的不可见的DNA。 12. 在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂,振荡器上振荡30秒混匀。 13. 13000-15000 g室温离心5分钟,离心底的侧面将形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率,可以将离心时间延长到20或30分钟。 14. 小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。 15. 在含RNA沉淀的离心管中加入1mL自备的75%乙醇,振荡混匀30秒。 16. 13000-15000g室温离心1分钟。 17. 小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。 18. 短暂快速离心,用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50μL)。注意不要吸弃沉淀。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响RNA的使用。 19. 室温放1-2分钟后立即加入50-100μL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则RNA将变得十分难溶。样品立即使用或存放于-80℃待用。 20. RNA完整性的电泳检测: 21. RNA产量产率测定:将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。 22. RNA纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。 |