碧云天十五周年庆!共享十五重惊喜! 四重惊喜:CRISPR/Cas9基因敲除技术服务 T7E1验证CRISPR/Cas9基因敲除用慢病毒,低至8888元! T7E1验证CRISPR/Cas9基因敲除细胞株,低至11111元!!! |
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本技术服务提供基于CRISPR/Cas9技术的目的基因敲除用慢病毒或目的基因敲除的指定细胞株,并且无论是慢病毒和细胞株都经过金标准T7E1法的验证。特别是目的基因敲除的细胞株,仅需30天即可获得并可用于目的基因敲除后的功能检测。赶快发送邮件到service@beyotime.co m咨询或订购所需的CRISPR/Cas9基因敲除用慢病毒或目的基因敲除的指定细胞株!" |
碧云天CRISPR/Cas9基因敲除技术服务项目表 碧云天CRISPR/Cas9技术服务优势 碧云天CRISPR/Cas9技术服务选购建议 碧云天CRISPR/Cas9技术服务流程 碧云天CRISPR/Cas9技术服务项目明细 碧云天CRISPR/Cas9技术服务示例 |
碧云天CRISPR/Cas9基因敲除技术服务项目表:
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碧云天CRISPR/Cas9技术服务优势: 1. 技术新:基于最新的CRISPR/Cas9技术,有效敲除目的基因并避免脱靶效应。 2. 标准严:提供经过金标准T7E1法验证的慢病毒或细胞株。 3. 筛选快:碧云天自行研发了基于CRISPR/Cas9技术的sgRNA快速筛选和验证体系,确保了可以在最短的时间内完成sgRNA的筛选和T7E1法 验证,同时也降低了筛选成本。 4. 时间短:目的基因敲除的细胞株仅需30天即可完成。 5. 价格低:CRISPR/Cas9基因敲除细胞株低至11111元,基因敲除用慢病毒低至8888元。 |
碧云天CRISPR/Cas9技术服务选购建议: 1. 对于CRIPR/Cas9技术不是很熟悉的用户,我们优先推荐选择T6666直接获取目的基因敲除的多克隆细胞株,这样就直接可以开始目的基因 敲除后的功能研究了。希望在多个细胞株中研究目的基因敲除后的功能时,我们优先推荐选择T6666和T6673。 2. 对于CRISPR/Cas9技术比较熟悉,能自行进行多克隆或单克隆细胞株的筛选并能自行进行T7E1鉴定的,在经费许可的情况下我们优先推荐 选择T6666,仅当经费比较紧张的情况下可以考虑选择T6662。希望在多个细胞株中研究目的基因敲除后的功能时,在经费许可的情况下我 们优先推荐选择T6666和T6673,仅当经费比较紧张的情况下可以考虑选择T6668或者T6662。 |
碧云天CRISPR/Cas9技术服务流程: 1. 用户下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书,发送至service@beyotime.com。 2. 双方确认并签订技术服务协议书,按照协议内容进行技术服务。 |
碧云天CRISPR/Cas9技术服务项目明细: T6662 CRISPR/Cas9基因敲除用慢病毒 全额预付特价8888元,30天内保证完成。 基于CRISPR/Cas9技术,并经金标准T7E1验证的目的基因敲除用慢病毒(含对照病毒)。 技术标准:提供一种经验证的能表达靶向目的基因的sgRNA和Cas9并能有效敲除目的基因的慢病毒。该慢病毒有puromycin抗性,感染细胞后可以用puromycin筛选目的基因敲除的细胞株。最终提供靶向目的基因的慢病毒108 TU (transducing unit),体积约1ml;靶向GFP的对照慢病毒或无任何靶向的对照慢病毒(任选一个)108 TU,体积约1ml;报告单一份(含提交物品清单、T7E1验证结果和病毒感染方法等)。 下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书 |
T6666 CRISPR/Cas9 基因敲除细胞株 全额预付特价11111元,30天内保证完成。 基于CRISPR/Cas9技术,并经金标准T7E1验证的目的基因敲除细胞株(含对照细胞株)。 技术标准:提供经验证的一个通过CRISPR/Cas9技术把目的基因敲除的定制细胞株(多克隆,可以用于目的基因的功能研究)。最终提供感染靶向目的基因的Cas9慢病毒后筛选获得的多克隆细胞2管,每管细胞数量不少于100万;感染靶向GFP的对照慢病毒或无任何靶向的对照慢病毒(任选一个)后筛选获得的对照细胞2管,每管不少于100万;包含目的基因敲除的T7E1验证结果的报告单一份(含提交物品清单、T7E1验证结果和细胞培养方法等)。 下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书 |
T6668敲除用慢病毒与敲除细胞株 全额预付特价15666元,30天内保证完成。 靶向同一个基因的基于CRISPR/Cas9技术的慢病毒和目的基因敲除细胞株(含对照细胞株)。 技术标准:靶向同一个基因的基于CRISPR技术能有效敲除目的基因的慢病毒和基于CRISPR技术的目的基因敲除细胞株。相当于靶向同一基因时,服务T6662和T6666的打包服务。最终提供的实验结果为T6662和T6666技术标准之和。 下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书 |
T6670相同基因敲除用慢病毒再次订购 全额预付特价4598元,15天内保证完成。 再次订购之前相同的基于CRISPR/Cas9技术能有效敲除目的基因的慢病毒(含对照病毒,仅限同一订购单位的同一订购人)。 技术标准:同T6662。 下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书 |
T6671相同基因敲除细胞株再次订购 全额预付特价1268元,7天内保证完成。 再次订购之前相同的基于CRISPR技术能有效敲除目的基因的细胞株(含对照细胞株,仅限同一订购单位的同一订购人)。 技术标准:同T6666。 下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书 |
T6673相同基因敲除的不同细胞株 全额预付特价6666元,30天内保证完成。 同时或后续制备靶向相同基因的基于CRISPR/Cas9技术能有效敲除目的基因的不同细胞株(含对照细胞株,仅限同一订购单位的同一订购人)。 技术标准:同T6666。 下载并填写CRISPR/Cas9技术服务协议书 |
T6677其它CRISPR/Cas9相关技术服务 请发送邮件到service@beyotime.com咨询。 |
碧云天CRISPR/Cas9技术服务示例: 基于CRISPR/Cas9技术的X基因敲除细胞株的构建 1. 根据用户提供的目的基因名称和基因ID,查找基因序列。 2. 设计3-5条sgRNA序列。构建含puromycin抗性的sgRNA和Cas9表达质粒。 图1. 含puromycin抗性的sgRNA和Cas9表达质粒的图谱信息。 |
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3. sgRNA切割靶基因DNA活性检测: 图2. sgRNA切割靶基因DNA活性检测和筛选。图中显示sgRNA1和sgRNA3有较强的切割活性,而sgRNA2的切割活性很弱。 |
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4. 选择对靶基因DNA切割活性强的sgRNA和Cas9表达质粒,包装慢病毒并测定滴度。同时包装靶向GFP或无任何靶 向的对照慢病毒并测定滴度。 5. 慢病毒感染目标细胞株,并用puromycin进行筛选。 6. 筛选获得的细胞株进行T7E1验证。 图3. 基因敲除细胞的T7E1法验证。敲除位点上下游设计PCR引物,提取细胞基因组DNA后进行PCR扩增。对PCR产物进行变性和退火处理后加入T7E1 (核酸内切酶,只切割碱基错配的DNA),敲除(knockout, KO)细胞的PCR扩增产物经T7E1消化后可见明显的切割条带,说明预期的敲除位点附近存在大量sgRNA引导Cas9切割形成的缺失突变。 |
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7. 目的基因敲除的Western检测验证(由于涉及是否存在合适抗体用于检测的问题,本项内容不包含在常规的技术服务范围内,如果需要须另行协商)。 图4. 目的基因敲除的Western验证。筛选获得的阳性细胞传代2次后,取细胞制备蛋白样品,每孔的蛋白上样量为20μg。用抗目的蛋白X的抗体进行检测,检测Actin作为内参。标示sgGFP的为感染了靶向GFP的慢病毒后筛选获得的细胞,标示sgX的为感染了靶向目的基因X的慢病毒后筛选获得的细胞。 |
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8. 目的基因敲除细胞的功能分析参考图5和6(本项内容不包含在常规的技术服务范围内)。 图5. 在诱导细胞死亡的条件下,只有敲除基因X的细胞可以存活。原始细胞(naive)及阴性对照细胞(sgGFP)约80%死亡。 |
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图6. X基因敲除影响蛋白M的磷酸化。X基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中蛋白M被特定处理诱导的磷酸化被完全抑制(A)。在通过CRISPR/Cas9技术X基因敲除的细胞中进行相同的实验,实验结果与MEF结果一致(B)。 |