大家都在搜
慢病毒(Lentivirus)载体是以人类免疫缺陷型病毒(HIV)为基础发展起来的基因治疗载体,它对分裂期和非分裂期细胞均具有感染能力,并可以在体内较长期地表达且安全性高。 凯基生物提供的慢病毒为复制缺陷型病毒,即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞,也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒,生物安全性较好,可以用于体内/体外基因过表达/沉默等研究。 凯基生物使用的是四质粒包装系统,是在Didier Trono实验室的慢病毒包装系统上改进而来,包括载体质粒、辅助质粒pMDLg/pRRE、pRSV-Rev和pMD2.G四种质粒组成。载体质粒删除了U3区的3’LTR,使载体失去HIV-1增强子及启动子序列,从而得到自身失活的慢病毒载体;pMDLg/pRRE载体中含有HIV病毒的gag基因,编码病毒主要的结构蛋白;含有pol基因,编码病毒特异性的酶;pRSV-Rev载体中含有rev基因,编码调节gag和pol基因表达的调节因子;pMD2.G载体中含有单纯疱疹病毒来源的VSV-G基因,提供病毒包装所需要的包膜蛋白。 慢病毒载体元件信息(以图2中质粒为例): 1.启动子:启动子是位于结构基因上游的一段可以行使转录起始功能的序列,载体上最常见的组成型启动子包含:β-肌动蛋白启动子(ACTB),巨细胞病毒(CMV),延伸因子-1α(EF1α),磷酸甘油酸激酶(PGK)、泛素C(UbC)等; 2.MCS:多克隆位点,为目的基因的插入提供位点; 3.CopGFP:荧光标签,用于指示载体转染成功或病毒包装成功; 4.PuroR:真核抗性,可用于筛选细胞株。
图2:pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-Puro载体图谱
凯基慢病毒包装服务相关产品 备注: 1.任何在原始载体上进行Tag添加或删除序列的订单,凯基均不保证使用效果。 2.干扰病毒三保一:人、大鼠、小鼠的编码基因可以承诺三保一,其余种属不承诺;LncRNA、circRNA等非编码RNA等不承诺三保一;定制干扰病毒不承诺干扰效果。 3.三保一范围:人、大鼠、小鼠的编码基因,在细胞感染效率达90%的条件下,3个靶点RNA干扰慢病毒至少保证1个对靶基因抑制效率在mRNA水平达到70%以上(大鼠和小鼠60%以上)。 4.过表达病毒:长度3000bp以下可以进行病毒包装,高GC含量(75%以上)、低GC含量(25%以下)以及较多重复片段的目的基因除外,长3000bp以下的病毒滴度至少达到1*10^8TU/ml;3000bp以上可以包装,不承诺滴度达到1*10^8TU/ml,滴度以实际病毒滴度测定为准。 凯基生物可提供用于病毒包装的载体列表
凯基生物可提供定制化慢病毒包装服务,只需提供相关信息,即可获得高纯度病毒用于科研实验,省时省力。欢迎咨询!
|