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一、溶解1. 离心收到的管子内为冻干粉,开盖前要快速离心10000-12000rpm x 30s。2. 溶解选择合适的溶解液,溶解到后边的浓度范围内。如此可以确保蛋白充分溶解复性,保证产品质量,请不要使用非建议溶液溶解。目的是使细胞因子从无活性的冻干粉状态充分溶解复性成为有活性的蛋白溶液。 注意:不要用涡旋振荡仪剧烈涡旋,可以用枪头轻轻吹打几次助溶。有的细胞因子溶解比较慢,需要在室温静置或者摇床低速摇一段时间使充分溶解。 3.短期储存溶解后的蛋白溶液可以在2-8度储存1周。4.长期储存如果您的实验,一周内不能用完。必须将第2步中获得的溶液用含载体蛋白的溶液进一步稀释。(详见:三、稀释)目的是对溶解一步的蛋白溶液进行稀释冻存。加入载体蛋白可以封闭掉管壁上的蛋白结合位点,且可以在低温下维持细胞因子的稳定。 三、稀释1. 配制配制0.1%BSA或者10%FBS或者5%海藻糖备用(确保无菌),这三种稀释液的配制的Buffer可以用PBS或者细胞基础培养基。使用以上三种稀释液的任意一种稀释重悬的蛋白溶液,稀释浓度根据您的使用浓度确定,不要低于10ug/ml。即可分装成小管,冻存在-20--80度。2.使用方法使用时取用一支冻存的细胞因子,加入到您的培养基中至使用浓度。细胞因子应避免反复冻融。 |