小刘胃口不大好……
辛辛苦苦提取出来的外泌体终于完成了定性定量,接下来到了动物实验。明明都进行到这一步了,就差动物实验基本上论文就可以大功告成了,经费在这时见了底。
小刘参考了下主流外泌体体内示踪方法:慢病毒转染,算了算成本,接近五位数,想到了老板的叮嘱:经费省着点用。
嘴巴里的饭菜顿时也如嚼蜡一般。 「胃口不好?」楼上的师姐这时候端着盘子坐到了小刘身边。
「师姐你说,外泌体体内示踪怎么就这么贵?」
「不贵呀,你用外泌体染料就可以体内示踪呀。」师姐说话同时把鸡腿夹到了小刘的盘子里:「我那还有剩,分你点?也不贵,每次一百多就搞定了。」
小刘顿时好似重获了嗅觉,鸡腿的香味直往鼻子里钻:「好呀好呀!」
外泌体体内示踪三只拦路虎
外泌体由于其独特的迁移、靶向和选择性内化进入特定细胞的能力,是潜力巨大的传递载体与治疗药物。体内追踪外泌体可以提供有关其生物分布、生理功能、迁移能力、靶向机制、毒性等重要信息。然而,外泌体研究中的体内行为-「到哪里去」始终困扰着勤俭的小刘课题组。
外泌体的体内示踪一直让常规的亲脂性外泌体染料无能为力,在实验中常常存在:
那么何种有什么染料可以完美解决外泌体体内示踪的难题?
接下来向大家介绍本文主角:EvLINK 555,深红色外泌体示踪染料,特异性标记外泌体外膜,不二次标记、脱落即「灭」,帮助科学家以极低成本回答外泌体「去哪里」的难题。
分别将 PBS、模拟 EvLINK 555 从外泌体表面脱落后引起结构变化的 EvLINK 555(-)、EvLINK 555 本身以及 EvLINK 555 标记外泌体以灌胃的方式干预小鼠,24 h 后处死小鼠观察某外泌体在对应组织中靶向性聚集的情况。可以清晰的观察出,在特定脏器内,如胃和肠(图 1 和图 2),EvLINK 555 标记的外泌体呈现出明亮的红色荧光,而三组对照组均无荧光信号。可见,EvLINK 555 不仅能够真实的指示外泌体在何种脏器中聚集,而且可以用以观测外泌体在对应脏器中的详细分布情况。
Fig.1 EvLINK 555 标记的外泌体与其对照组在胃中的分布情况
Fig.2 EvLINK 555 标记的外泌体与其对照组在肠中的分布情况
结合牢固
EvLINK 555 与外泌体的结合非常紧密,即便在胃酸这种极端环境中也不会从外泌体表面脱落(图 3)。
Fig.3 EvLINK 555 标记的外泌体在胃中的分布情况
高特异性、无自身荧光干扰
EvLINK 555 本身并不会在任何脏器内检测到荧光信号(图 4),表明染料不会因为自身荧光干扰实验结果,特异性极强,不会标记非外泌体,并不会在体内标记脂类引起假阳性。
Fig.4 EvLINK 555 染料自身在各脏器内的荧光干扰情况
脱落即「灭」
模拟 EvLINK 555 从外泌体表面脱落引起结构变化的 EvLINK 555(-)对照无论在任何脏器内都无法检出荧光信号(图 5),表明脱落后的染料不会发出干扰观测的荧光信号,可以准确反应外泌体在体内的代谢周期。
Fig.5 EvLINK 555(-)在各脏器内的分布情况
超高标记率,不二次标记
EvLINK 555 对外泌体的标记率高达 99%,然而模拟染料从外泌体表面脱落引起结构变化的 EvLINK 555(-)对外泌体的标记率则骤降至 2%(图 6),表明脱落的染料不会在体内二次标记其他脂类造成假阳性。 Fig.6 EvLINK 555 对外泌体的标记率(a)与 EvLINK 555 对外泌体的标记率(b)
高效示踪
EvLINK 555 标记外泌体后,可见外泌体的聚集存在非常明显的靶向性,在胃、大肠、肝中观测到了明显的外泌体荧光并可清晰观测到外泌体的分布情况,心脏中检测出少量信号,而脑、肾中则并未检测出(图 7)。
Fig.7 EvLINK 555 标记的某外泌体在各脏器内的分布情况
「师姐,别再夹给我了,我饱了快,你下午几点有空呀,我去你实验室薅染料!」
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