实验室小伙伴们对荧光定量的印象,首先是:技术先进,总是和好文章相关;其次是:贵(仪器贵,试剂贵)和神秘(被导师警告只能高年级师兄师姐通过申请才能做的这类实验)。看得见,却摸不着,能发好文章,却被限制使用,荧光定量实在藏着太多的秘密!荧光定量到底是什么样的实验?技术诞生二十多年了,为什么价格还那么高? 秘密一:qPCR技术本质其实是“普通PCR+光学监控系统”
qPCR技术原理:通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。qPCR本质上是普通PCR加上一套光学观察系统,普通PCR类似电影剧终时的一张照片(PCR扩增结果),qPCR则是完整的全部电影(PCR的全过程)。不同的检测目的,需要不同的荧光定量PCR仪器及与之对应的qPCR mix。qPCRmix的类型大致可以分为以下几个类别。 秘密二:荧光定量仪器只能使用厂家配套的qPCRmix吗? 荧光定量PCR的神秘感,完全是人为因素造成的! A、导师说:仪器贵啊,不要随便动qPCR仪器!首先,qPCR仪价格昂贵,动辄几十万一台!很多实验室都会叮嘱学生不要乱动qPCR仪器,甚至有些实验室会把仪器锁上,只有高年级的师兄师姐通过多次申请,才能使用! 低年级学生只能在旁边观看学习。其次,有些实验室经费紧张,没有qPCR仪器,只有特别重要的实验,才申请使用公用qPCR仪器进行实验!再次,qPCR实验一般需要先提取RNA和反转录实验,试剂成本高、实验难度大!qPCR在实验室愈显“高端”“上流”,锁在房间里的qPCR仪器更显神秘!此外,由于仪器的不同,有些会用到ROX染料修正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,而有些不用,客户便会很困惑(其实这个就是根据仪器选择对应的试剂,下文会介绍)。
B、进口品牌仪器厂商说:我们的仪器和试剂必须配套,效果才能最好! 实验室在最初花费大额经费购买PCR仪器时,也被强制性的购买了配套的试剂。“我们的仪器必须和我们的试剂配套!”“原配的试剂效果稳定,使用其他的试剂了问题,我们不负责!”。昂贵的仪器已经买了,试剂贵点也算合理吧!当实验室测试成功,“测试成功后就别折腾了,好不容易稳定的体系。”实验室老师如是说。
C、进口品牌代理商说:进口稳定靠谱,国产的不行 国内被高度垄断的qPCR市场,进口品牌拥有无与比拟的话语权。十多年来,客户使用进口的仪器和试剂,接受指导进口品牌的技术指导,看的是进口品牌代理商的广告,也就习惯了高价:这个实验本身就这么贵!国内厂商突破层层技术封锁,在qPCR上技术终于成熟,而价格却只有进口的几分之一,兴冲冲的拿到市场。而市场(进口品牌代理商)却说:进口稳定靠谱,国产的不行,不知道什么时候就会出问题!
qPCR技术已经诞生二十多年,国内的qPCR仪器和试剂技术早已成熟,市面上简单快速的RNA提取试剂盒和一管化反转录试剂盒的开发, qPCR实验已不显那么昂贵和困难!qPCR实验的迷雾已经吹开,被锁住的实验需要放开了!
当国内没有qPCR技术时,进口厂商拥有定价权,我们只能硬着头皮接受。经多年的研发和多年的市场检验,qPCR技术国内已经成熟。仪器和试剂必须配套?对于一种通用常见的实验,这简直是个笑话,针对仪器开发试剂也并不是很难的事情。技术已经成熟,进口品牌十几年的超额利润时间,该结束了!原配试剂太贵了,而且也不一定好!荧光定量试剂的真实价格,该显现了! 秘密三:荧光定量试剂和成分价格揭秘! qPCR实验部分和普通PCR的实验并没有多少差别,但价格怎么差那么多呢?上图荧光定量试剂成本并没有给出答案。这个试剂贵的不是成本,而是技术壁垒和市场话语权。 国内荧光定量技术已经成熟,进口品牌十几年的超额利润时间,该结束了!经多年科研攻关,终于突破国外厂商的专利封锁,研制的抗体法荧光定量Mix,具有超快速度,高特异性,高灵敏度,重复性好,定量准确,全封闭化反应杜绝污染等优点。聚合美进场,让荧光定量试剂不再那么昂贵,已经为北大、清华、中科院、中国农大等单位很多实验室节约大量经费,受到客户的热烈欢迎!
为什么大家对聚合美荧光定量Mix 系列产品如此受欢迎? 01超良心价格 自几年前进入市场,聚合美让荧光定量不再是个昂贵的实验,让每个研究生都能做得起。同时,客户也不用完全受制于进口品牌,用聚合美荧光定量mix,客户发现其产品效果和使用900-1500元的进口试剂完全没有差别,聚合美超良心的价格让客户再也不用忍受荧光定量mix的高价!聚合美荧光定量mix被越来越多客户选择,享受超值的质量感受! 和进口品牌荧光定量mix相比,聚合美彰显“群众路线”价格气质! 促销价基础上购买任意一包荧光定量mix(5ml)就送一只价值399元的第三代胶红核酸染料(货号:MF380-01)!选择聚合美抗体法荧光定量mix,打掉荧光定量这个实验室吞金兽!活动时间:即日起至2020年12月31日。02优良的品质 聚合美荧光定量mix采用抗体法抑制Taq酶星号活性,特异性高重复性好,灵敏度高!30秒预变性,可用于两步法和三步法,有效节约实验时间! 和进口产品相比,MF013重复性更好!注:测试品牌为日本TA公司和聚合美MF013,以人cDNA极低表达量的基因为模板。 结果显示Ct值均为30,曲线均为单峰,曲线平滑,聚合美MF013表现出极高的特异性和可重复性! 和进口产品相比,MF013荧光值更高!注:Target1:actin Target2:p16ink4 Target3:p27kip1 B:MF013 C:日本TA公司 D:美国A公司。 在ABI机器上actin,P27kip1 P16ink4三种基因的扩增结果,日本TA公司和美国A公司作为对照。 如图所示,聚合美荧光定量试剂在ABI机器上和TA公司及美国A公司相比,荧光值更高,Ct值稳定,曲线平滑,重复性好,特异性好!聚合美试剂完美适应ABI系列仪器! 和进口产品相比,MF013更适合低拷贝模板! 注:a,b:聚合美MF013 c:日本TA公司 d:日本TO公司 。 B:MF013 C:日本TA公司 D:美国A公司。
极低拷贝样品测试中四种试剂起峰都较晚,均在33-34左右。TO公司产品怀疑有二聚体杂峰。 高拷贝序列四种试剂Ct值较吻合,在杂峰部分有起峰的迹象,可能是引物特异性的问题。
聚合美荧光定量Mix在低拷贝和高拷贝样品中均表现优异,在低拷贝样品的扩增中特异性和灵敏度更好! 03适用性广
可用于各种样本的qPCR实验,多种产品针对不同仪器! ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
MF787和MF055-plus:适合不需要ROX校正的仪器 替代其他品牌及货号:日本Ta公司RR420A,RR820A,日本To公司QPS-201;国产T品牌AQ101/AQ131/AQ141,国产G品牌 A301 适合机型:Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-rad iCyler iQ,iQ5,CFX96等。
MF797和MF015-plus:适合需要Low ROX校正的仪器 替代其他品牌及货号:国产V品牌Q331,其他品牌都是要客户自己用高浓度ROX来配,很少有预混好的 适合机型:ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio 3 System,QuantStudio 5 System,QuantStudio6 Flex System,QuantStudio7 Flex System,ViiA 7 system,Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。
MF013和MF015:适合需要High ROX校正的仪器 替代其他品牌及货号:日本To公司QPK-201,国产V品牌Q341 适合机型:ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。 |