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脱氢抗坏血酸(DHA)含量测定意义: 哺乳动物血液中的葡萄糖称为血糖,是其体内糖的主要运输形式。血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定,调节失衡时出现高血糖和低血糖。糖尿病、颅内压增加和脱水症等均可引起高血糖;饭后,精神紧张也可出现生理性高血糖。相反,胰岛β细胞增生或肿癌等,垂体、肾上腺皮质和甲状腺功能减退,以及严重肝病患者均可出现低血糖症状。此外,饥饿和剧烈运动可引起暂时的低血糖。测定原理:葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在505nm有特征吸收峰。需要的仪器,耗材:可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。 需自备的仪器和用品: 低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏 水。 标抗体技术: 1、脱氢抗坏血酸(DHA)含量测试盒50管/48样说明书酶分子与抗原或抗体供价结合; 2、酶标抗原与存在于组织细胞或吸附于固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合,并洗下未结合的物质; 3、滴加底物溶液后,底物在酶作用下水解呈色,可根据颜色反应来判定有无相应的免疫反应; 4、颜色反应的深浅与标本中的相应抗原或抗体的量成正比; 5、此种有色产物可用肉眼或分光光度计加以测定。 实验实例: 1、 取 0.1g 红叶石楠加提取液 1 mL,冰上充分研磨,16000g 4℃离心 20min,取上清液稀释 4 倍后按照测定步骤 操 作 , 用 微 量 石 英 比 色 皿 测 得 计 算 ΔA 测 定 管 =A4-A3=1.0792-1.0621=0.0171 , ΔA 标 准 管 =A2-A1=0.4723-0.0746=0.3977,按样本质量计算含量得: DHA(µmol/g 质量) =1×ΔA 测定管÷ΔA 标准管÷W×4(稀释倍数)=1.720 µmol/g 质量。 注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。 |