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介绍: ELISA 试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA 检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等,比较常见的叫法是 ELISA 检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。 Elisa 生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。 特点: 1. 高效、灵敏、特异的抗体。 2. 稳定的重复性和可靠性。 3. 吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体。 4. 适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种标本类型。 5. 节省实验经费。 操作方法: 1. 标准品的稀释,请按照说明书进行操作。 2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。 3. 加样:不规范的移液操作可能带来误差。 1)空白孔,空白对照孔不加样品,生物素标记的抗 NE 抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂 A&B 和终止液,其余各步操作相同; 2)标准品孔:加入标准品 50ul,链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加); 3)待测样品孔:加入样本 40ul,然后各加入抗 NE 抗体 10ul、链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃ 温育 60 分钟。 4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。 6. 显色:每孔先加入显色剂 A50ul,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃ 避光显色 15 分钟。 7. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 8. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后 10 分钟以内进行。 9. 根据标准品的浓度及对应的 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的 OD 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。 洗板方法: 一、手工洗板方法: 甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少 0.35 ml 注入孔内,浸泡 1-2 分钟。根据需要,重复此过程数次。 二、自动洗板: 如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 注意事项 1. 从 2-8℃ 取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少 30 分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。 3. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。 4. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。 5. 不同批次试剂盒不能混用,如遇试剂不够,请及时联系客服解决 6. 底物 B 对光敏感,避免长时间暴露于光下。 7. 中、英文说明书或许会有不一致之处,请以英文说明书为准。 8. 保存温度:2-8℃。 9. 有效期:6 个月 (2-8℃)。 咨询电话:400-0918-500 客服电话:13917838824 邮箱:lianshuo@vip.126.com |