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一样米, 养百人, 同样做WB为什么我的结果总和别人不一样? |
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解决方案: |
a.降低蛋白上样量: |
通常蛋白上样(loading)量为30-50 ug,但有些蛋白表现量较高(如beta actin),此时可依蛋白表现量,调整上样量。 |
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解决方案: |
a.增加抗体稀释倍数:产生过曝时可增加一抗、二抗的稀释倍数。 |
b.减少孵育时间 |
c.於4℃孵育 |
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解决方案: |
a.缩短曝光时间:过曝时可缩短曝光时间,减少过曝的情形。 |
b.使用低灵敏度的ECL:过曝现象也有可能是因为化学发光底物过强导致的, 可选用灵敏度较低的化学发光底物来改善。 |
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说明: |
化學發光底物等級 |
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化学发光底物一般有三种等级,femto(飞克, 10-15g), pico(皮克, 10-12g), 及plus(低皮克级, 10-12~ 10-9g) ,可依蛋白表达量挑选适合的化学发光底物。 |
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