本期导读:IHC(Immunohistochemistry, 免疫组织化学)是用标记的特异性抗体(或抗原)对组织内抗原(或抗体)的分布进行组织和细胞原位检测的技术。IHC实验中保护组织的两种主要方法是对组织进行石蜡包埋和冰冻,其中石蜡包埋是制作组织标本最常用、最基本的方法。 石蜡包埋对于组织形态保存完好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究。实验组织保护的质量是保证病理报告准确性的重要环节。 本期将介绍石蜡包埋过程中容易忽略,但对实验结果影响很大的实操注意点。
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤:固定,脱水,透明,浸蜡和包埋。 1、固定 取新鲜组织浸泡在4%Paraformaldehyde或10%Formalin溶液中固定24-48h。固定完后自来水冲洗五次,各30min。 Tips:① 组织离体后应在30min之内固定。 ② 固定液容积应为组织的5-10倍,固定时间根据组织大小而定,固定时间过长,修复后抗原暴露不完全;时间过短则固定不充分。 ③ 脱水机内固定液必须及时更换。 ④ 固定后应水洗,否则易造成脱片和染色不新鲜,也不利于蜡块内抗原、基因的保存。 2、脱水 组织经过50%、70%、85%、95%的梯度酒精各30min,无水乙醇两次,每次30min完成脱水。 Tips: 分别经过无水乙醇:dimethylbenzene、dimethylbenzene(Ⅰ)(根据组织透明度,可减少或增加第二遍dimethylbenzene透明的时间)、dimethylbenzene(Ⅱ)各30min。 Tips: 4、浸蜡 蜡Ⅰ,蜡Ⅱ各30min. Tips: 将金属托放入熔化的石蜡,再放入组织,冷固待石蜡凝固。 Tips: 《IHC/IF/ICC实验方案流程图及所需试剂》 |