原因:1.模板:含有抑制物,含量低 2.Buffer对样品不合适 3.引物设计不当或者发生降解 4.反应条件:退火温度太高,延伸时间太短 对策:1.纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量 2.更换Buffer或调整浓度 3.重新设计引物(避免链间二聚体和链内二级结构)或者换一管新引物 4.降低退火温度、延长延伸时间 问题2:非特异性扩增 ( 现象:条带与预计的大小不一致或者非特异性扩增带 ) 原因:1.引物特异性差 2.模板或引物浓度过高 3.酶量过多 4.Mg2+浓度偏高 5.退火温度偏低 6.循环次数过多 对策:1.重新设计引物或者使用巢式PCR 2.适当降低模板或引物浓度 3.适当减少酶量 4.降低镁离子浓度 5.适当提高退火温度或使用二阶段温度法 6.减少循环次数
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不同浓度模板用本试剂进行PCR扩增, 模板浓度高至20ng,低至0.16ng, 都能扩增出较好的条带。 模板浓度:1、20ng 2、4ng 3、0.8ng 4、0.16ng |
目录号 | 规格 | 目录价 |
MR0301-1 | 1mL | 180 |
MR0301-5 | 5mL | 700 |
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