传统细胞冻存液简介 成份:新鲜培养基,含10%胎牛血清和5-10%DMSO。
冻存方法:冷冻管置于4℃ 10分钟→-20℃ 30分钟→-80℃ 16-18小时(或隔夜)→液氮长期储存。-20℃不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡。
必拓生物无血清细胞冻存液简介
成份:不含血清,含DMSO、葡萄糖等各种细胞营养成分、pH调节剂等成分。不含动物来源性蛋白,能减少各类病毒、霉菌和支原体等污染,确保冻存细胞安全。通用于各种动物细胞株。
冻存方法:细胞沉淀加无血清细胞冻存液,直接放入-80℃长期储存即可。
可见无血清细胞冻存液的优势:即用型,通用性,简单、安全、高效
附表1. 必拓生物无血清细胞冻存液与传统细胞冻存液对比
|
传统细胞冻存液 |
必拓生物无血清细胞冻存液 |
安全性 |
动物来源病毒、霉菌和支原体等污染的风险高 |
无动物来源病毒、霉菌和支原体等污染的风险 |
冻存细胞种类 |
适合含血清细胞冻存 |
适合各类细胞冻存,尤其是无血清培养细胞 |
无血清培养细胞生长状态 |
易改变易由悬浮状态回复贴壁状态 |
保持悬浮培养状态 |
批次差异 |
批次差异大 |
无批次差异 |
操作方法 |
较复杂 |
简单快捷 |
保存设备 |
要求高(液氮) |
要求低(低温冰箱) |
操作安全性 |
低(易发生冻伤和爆裂) |
高 |
微量冻存 |
细胞易死亡,存活率低 |
细胞存活率高 |
整板冻存 |
不可行 |
可行,且方便快捷 |
附表2. 必拓生物无血清细胞冻存液冻存细胞存活率测试数据
表2.1 6h后实验组和对照组细胞存活率比较(实验组均使用必拓生物无血清细胞冻存液)
细胞名称 |
基因修饰-种属-来源 |
实验组存活率(6h) |
对照组存活率(6h) |
显著性差异 |
对照组细胞冻存液 |
GFP-MDA-MB-231 |
GFP标记-人乳腺癌 |
92.44 |
↑ |
90.08 |
* |
L15+FBS+DMSO |
EGFR-KO-MDA-MB-231 |
敲除EGFR-231 |
84.97 |
↑ |
65.35 |
*** |
L15+FBS+DMSO |
MCF-7 |
人乳腺癌 |
83.33 |
↑ |
80.2 |
*** |
DMEM+FBS+DMSO |
ER-KO-MCF-7 |
敲除雌激素受体 MCF7 |
71.61 |
↑ |
41.05 |
*** |
DMEM+FBS+DMSO |
4T1 |
小鼠乳腺癌 |
92.58 |
- |
92.26 |
- |
RPMI1640+FBS+DMSO |
A549 |
人非小细胞肺癌 |
81.32 |
↑ |
80.5 |
* |
F12K+FBS+DMSO |
Capan-1 |
人胰腺癌 |
88.93 |
↑ |
83.18 |
* |
IMDM+FBS+DMSO |
IR-KO-Capan-1 |
敲除胰岛素受体-Capan-1 |
46.46 |
↑ |
27.84 |
*** |
IMDM+FBS+DMSO |
AsPC-1 |
人胰腺癌 |
58.94 |
↑ |
44.3 |
*** |
RPMI1640+FBS+DMSO |
PANC-1 |
人胰腺癌 |
89.66 |
↑ |
85 |
** |
DMEM+FBS+DMSO |
PAN02 |
小鼠胰腺癌 |
78.42 |
↑ |
67.91 |
*** |
DMEM+FBS+DMSO |
IR-KO-PANO2 |
敲除胰岛素受体-PANO2 |
46.87 |
↑ |
30.78 |
*** |
DMEM+FBS+DMSO |
HUVEC |
人脐静脉内皮细胞 |
- |
|
- |
- |
F12K+FBS+DMSO |
VEGFR-KO-HUVEC |
敲除VEGFR-HUVEC |
- |
|
- |
- |
F12K+FBS+DMSO |
bEnd 3 |
鼠脑微血管内皮细胞 |
72.96 |
- |
71.28 |
- |
DMEM+FBS+DMSO |
HACAT |
人皮肤角质细胞 |
90.95 |
|
93.51 |
** |
DMEM+FBS+DMSO |
B16 |
鼠源黑色素瘤 |
85.51 |
↑ |
84.51 |
* |
DMEM+FBS+DMSO |
TSC2-KO-B16 |
敲除TSC2-B16 |
57.45 |
↑ |
45.11 |
*** |
DMEM+FBS+DMSO |
HT-29 |
人结肠癌 |
78.39 |
↑ |
75.69 |
* |
McCoy+FBS+DMSO |
PC 3 |
人前列腺癌 |
71.7 |
↓ |
73.44 |
** |
RPMI1640+FBS+DMSO |
HepG2 |
人肝癌 |
90.34 |
↑ |
88.01 |
* |
DMEM+FBS+DMSO |
Hela |
人宫颈癌 |
93.18 |
↑ |
91.91 |
* |
RPMI1640+FBS+DMSO |
293T |
人肾上皮细胞 |
95.58 |
- |
95.16 |
- |
DMEM+FBS+DMSO |
K562 |
人慢性髓原白血病细胞 |
80.27 |
↓ |
82.47 |
** |
RPMI1640+FBS+DMSO |
imDC |
人原代不成熟DC细胞 |
56.75 |
↑ |
51.32 |
*** |
RPMI1640+FBS+DMSO |
spermatogonial stem cell |
小鼠原代精原干细胞 |
62 |
↑ |
47.59 |
*** |
MEM+FBS+DMSO |
表2.2 24h后实验组和对照组细胞存活率比较(实验组均使用必拓生物无血清细胞冻存液)
细胞名称 |
基因修饰-种属-来源 |
实验组存活率(24h) |
对照组存活率(24h) |
显著性差异 |
对照组细胞冻存液 |
GFP-MDA-MB-231 |
GFP标记-人乳腺癌 |
97.7 |
- |
97.4 |
- |
L15+FBS+DMSO |
EGFR-KO-MDA-MB-231 |
敲除EGFR-231 |
80.46 |
↑ |
62.7 |
*** |
L15+FBS+DMSO |
MCF-7 |
人乳腺癌 |
89.09 |
↑ |
86.48 |
* |
DMEM+FBS+DMSO |
ER-KO-MCF-7 |
敲除雌激素受体 MCF7 |
73.34 |
↑ |
40.6 |
*** |
DMEM+FBS+DMSO |
4T1 |
小鼠乳腺癌 |
96.25 |
↑ |
94.87 |
* |
RPMI1640+FBS+DMSO |
A549 |
人非小细胞肺癌 |
84.8 |
↑ |
76.12 |
*** |
F12K+FBS+DMSO |
Capan-1 |
人胰腺癌 |
- |
- |
- |
- |
IMDM+FBS+DMSO |
IR-KO-Capan-1 |
敲除胰岛素受体-Capan-1 |
50.03 |
↑ |
20.18 |
*** |
IMDM+FBS+DMSO |
AsPC-1 |
人胰腺癌 |
61.08 |
↑ |
42.79 |
*** |
RPMI1640+FBS+DMSO |
PANC-1 |
人胰腺癌 |
90.96 |
↑ |
89.42 |
* |
DMEM+FBS+DMSO |
PAN02 |
小鼠胰腺癌 |
81.7 |
↑ |
70.9 |
*** |
DMEM+FBS+DMSO |
IR-KO-PANO2 |
敲除胰岛素受体-PANO2 |
46.58 |
↑ |
24.58 |
*** |
DMEM+FBS+DMSO |
HUVEC |
人脐静脉内皮细胞 |
88.14 |
↑ |
85.75 |
* |
F12K+FBS+DMSO |
VEGFR-KO-HUVEC |
敲除VEGFR-HUVEC |
60.91 |
↑ |
31.72 |
*** |
F12K+FBS+DMSO |
bEnd 3 |
鼠脑微血管内皮细胞 |
78.7 |
↑ |
76.95 |
* |
DMEM+FBS+DMSO |
HACAT |
人皮肤角质细胞 |
- |
- |
- |
- |
DMEM+FBS+DMSO |
B16 |
鼠源黑色素瘤 |
- |
- |
- |
- |
DMEM+FBS+DMSO |
TSC2-KO-B16 |
敲除TSC2-B16 |
60.67 |
↑ |
40.86 |
*** |
DMEM+FBS+DMSO |
HT-29 |
人结肠癌 |
80.41 |
- |
80 |
- |
McCoy+FBS+DMSO |
PC 3 |
人前列腺癌 |
89.33 |
↑ |
84 |
*** |
RPMI1640+FBS+DMSO |
HepG2 |
人肝癌 |
- |
- |
- |
- |
DMEM+FBS+DMSO |
Hela |
人宫颈癌 |
- |
- |
- |
- |
RPMI1640+FBS+DMSO |
293T |
人肾上皮细胞 |
- |
- |
- |
- |
DMEM+FBS+DMSO |
K562 |
人慢性髓原白血病细胞 |
84.49 |
↑ |
80.3 |
* |
RPMI1640+FBS+DMSO |
imDC |
人原代不成熟DC细胞 |
61.89 |
↑ |
51.66 |
*** |
RPMI1640+FBS+DMSO |
spermatogonial stem cell |
小鼠原代精原干细胞 |
70.24 |
↑ |
44.6 |
*** |
MEM+FBS+DMSO
|
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