师妹去年年底的 qPCR 实验进展一直不顺利。假期一结束,就第一个就冲回实验室,势必要在全员到齐前就搞定 qPCR。结果我还在去学校的车上,师妹的微信就发来了: 等到实验室和师妹梳理完流程吓了一跳,原来是很多 qPCR 实验细节都没注意到:
对于 qPCR 这类对实验材料以及操作技巧都要求严格的实验来说,急着赶进度往往事倍功半,其中的细节不注意,实验结果只能「放烟花」。 为了避免大家在 qPCR 实验中出现类似的问题,我们贴心准备了相关干货供大家学习,帮助大家在实验操作上少走弯路!(文末试用有奖,不要错过哦~) qPCR 实验 Q&A 1、当面对 qPCR 扩增曲线异常时,如何应对? 正常的 qPCR 扩增曲线应为 S 型,理想的 CT 值范围在 20~30。若出现 CT 值偏大、无平台期或平台期下降等异常情况,可尝试以下调整: ● 若 CT 值偏大,可能是模板量不足或基因表达丰度低,建议增加模板量并观察 CT 值是否按预期倍数减少。 ● 考虑 qPCR 反应条件或引物设计可能不合适,导致扩增效率降低。此时,可优化反应条件或调整引物设计。 ● 若怀疑 qPCR 体系中存在酶抑制剂,影响酶活性,建议对反应体系进行改良。 2、灵敏度低和特异性差的问题,如何优化实验? 研究样品中靶标丰度低是常见问题。使用适量模板 RNA 至关重要:过多可能导致特异性下降,过少则可能无法检出。 3、如何解决批次效应和复孔重复性差的问题? 批次效应和复孔重复性差通常源于加样误差,建议定期校准移液器,并通过扩大反应体系或预先配制预混液来进行优化,有助于提高实验的准确性和可重复性。 那么,如何在减少失误的同时又能快速完成 qPCR 实验呢? 开学福利重磅来袭 福利来啦!擎科生物为了助力科研人顺利完成 qPCR 实验,在开学季特别推出 1.1 × EasyQ SYBR qPCR Mix 优质预混液免费试用👇👇👇,实现 20 min 高效扩增,免加水预混 ROX 简化实验操作,「省时省力少踩坑」。 1.1 × EasyQ SYBR qPCR Mix 产品特点 1.1 × EasyQ SYBR qPCR Mix 性能测试 同时奉上超值试用活动 & 开学大促,首购还有平板、咖啡机等大礼相送,不容错过! 福利一,点击下方产品图片,即可申请获得上述同款预混液 0 元试用装。 福利二,购买一包产品即享受七折,赠送罗技鼠标。购买五包产品加送五包,赠东菱咖啡机。购买十包加送十二包,赠华为平板。 擎科生物 & 达领生物,开年大促,助力你「遥遥领先」!点击下方图片即可获取更多产品目录、购买方式。福利多多,礼品多多,一站式完成开年试剂采购! 达领生物 达领生物是擎科生物集团创立的新兴品牌,专注研发及生产生物试剂、IVD 酶原料与仪器设备,是对「擎科生物」试剂线的延伸和再创造。「达领生物」保留了「擎科生物」试剂线的优秀产品,并进行了悉心打磨与升级,将以「达领生物」品牌的新形象呈现在各位科研工作者面前,用稳定的质量和高价比的产品与服务,让科研变得更简单、更高效、更智能、更安全。 内容策划:潘成 题图来源:图虫创意 |
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