各位大虾们，我最近在做一个基因启动子的活性检测，用的是promega 公司的试剂盒，构建了几个5’逐渐缺失的报告基因，做转染的时候用的是跨物种的T98G cell line, 选择peGFP来估计转染效率，同时用PGL-3-Control和PGL-3-Basic来估计整个测量系统，结果显示转染效率还是可以，主要是PGL-3-Control组的荧光素酶活性值达到25万，同时PGL-3-Basic组的读数还不到100，也就是说体系是没有问题的，关键是我自己构建的PGL-3报告质粒都却都和PGL-3-Basic读数差不多。构建的质粒是经过测序验证的，而且抽出的质粒测OD值和跑胶也是没有问题的。实在不知道问题出在哪里，请各位高手帮忙瞧一眼，那些方面有可能是问题？
先谢谢了！！:)

没看明白，但是我觉得关于luciferase系统，似乎它们都有自己的内参，不用peGFP来看转染效率吧。

另外，你的promoter是不是组织特异性的啊，在这个细胞系里面，反式元件没有表达？

　　谢谢bacchante 大侠回复，
　　前几天出去了，所以没有及时跟你交流，关于内参，我选的是Ｒenilla　luciferase来做的，peGFP只是在收样品之前自己对转染的一个判断，（因为我是刚开始接触转染实验，之前都是分子克隆）．关于我自己构建的表达质粒不能正常表达luciferase，我也是怀疑在这个细胞系里面，没有所需要的反式元件，所以换了另外的两种工程细胞，ＣＯＳ７，Ｃ６，其中ＣＯＳ７在其他类似研究的文章中是用到的，但是结果显示还是不行，依然在郁闷中．老板怀疑是不是用的PGL-3-Basic本身有问题，所以打算换一个重新构建来试试．不知道师兄（师姐）有没有其他的建议，期待做答，谢谢

我的邮箱是dongdm0349@126.com，可以多一个渠道联系．谢谢！！！