胶体金标记技术路线的选择

胶体金标记技术路线的选择

 

1 ．包埋剂

根据抗原或标记底物性质决定包埋剂种类。

蛋白类，推荐使用 K4M ；包埋后立即切片标记。

外泌蛋白可选择 spurr 。可长期保存使用。

细胞结构组分，如纤维素、 b -1,3- 葡聚糖、几丁质、多酚化合物等，可选择 spurr 。

2 ．胶体金体积

精细定位如病毒、细胞器定位等选用 5 nm 胶体金。细胞壁组分采用 15-20 nm 胶体金。多标记时，胶体金直径推荐选用 6 nm 、 10 nm 、 15 nm ；稳定抗原采用较大颗粒胶体金。一般蛋白标记采用 10 nm 。

3 ．通用探针选择

IgG-gold ： -20°C 可保存 1 年；但定位时胶体金距离标记位点较远，不适于精细定位。

Protein A/G ： -20°C 可保存 3 个月；但定位时胶体金距离标记位点较近，适于精细定位和多标记。

Protein A 和 Protein G 与不同抗体之间的亲和性

 

 

抗体来源	IgG 类型	与 Protein A 的亲和性	与 Protein G 的亲和性
人	IgG( 正常 )

++++

 

 

++++

 

 

－

 

++++

 

 

IgG1

 

 

++++

 

 

+++

 

 

++

 

 

IgG1

 

 

－

 

－

 

+

 

 

IgG

 

 

IgG