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化学生物学实验技术

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位点专一重组

λ噬菌体DNA的整合和切离是典型的位点专一重组。λ噬菌体感染大肠杆菌后,或是进入裂解生长,或是进入溶原生长。当噬菌体裂解宿主细胞的功能受到抑制,噬菌体DNA整合进宿主染色体并随宿主染色体而进行复制,或作为一个独立的附加体(如P22)。这称为溶原性(lysogeny),这类噬菌体称为溶原性噬菌体(lysogenic phage)。当噬菌体进入宿主细菌后以一种失控状态进行复制,宿主染色体被降解作为噬菌 ...

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染色体倒位

染色体倒位(inversion)是由于同一条染色体上发生了两次断裂,产生的断片颠倒1800后重新连接造成的。如果倒位发生在染色体的一条臂上,称为臂内倒位(paracentric);如果倒位包含了着丝粒区,则称为臂间倒位(pericentric)。臂内倒位不改变两个臂的长度,要用染色体显带技术才能识别;臂间倒位则使两个臂的长度出现增减,即使未作染色体显带处理也可观察区分。 在减数分裂中,正常的 ...

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转座子

转座子是细菌细胞里发现的一种复合型转座因子,这种转座因子带有同转座无关的一些基因,如抗药性基因;它的两端就是IS,构成了“左臂”和“右臂”。两个“臂”可以是正向重复,也可以是反向重复。这种复合型的转座因子称为转座子(trans—poson,Tn)。这些两端的重复序列可以作为Tn的一部分随同Tn转座,也可以单独作为IS而转座。Tn两端的IS有的是完全相同的,有的则有差别。当两端的IS完全相同时,每一 ...

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长散在重复序列

长散在重复序列(10ng interspersed nuclear elements,LINE),意为散在分布的长细胞核因子,是散在分布在哺乳动物基因中的一类重复序列,这种重复序列较长;另一类短散在重复序列的细胞核因子称为(short interspersed nuclear elements,SINE)。LINE是可以自主转座的一类反转录转座子,来源于RNA聚合酶Ⅱ的转录产物;SINE则是非自主 ...

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反转录转座子

反转录转座子(retrotransposon或retroposon)指通过RNA为中介,反转录成DNA后进行转座的可动元件。这样的转座过程称为反转座作用(retrotrans—position)。反转座作用出现在真核生物,包括能自由地感染宿主细胞的反转录病毒,以及通过以RNA为中介进行转座的DNA序列。除反转录病毒外,反转录转座子可以分成两类:一类是病毒超家族(viral superfamily) ...

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假基因

假基因(pseudogene)具有与功能基因相似的序列,但由于有许多突变以致失去了原有的功能,所以假基因是没有功能的基因,常用ψ表示。1977年在爪蟾的5S基因系统中发现了假基因,以后在珠蛋白基因簇、免疫球蛋白基因簇以及组织相容性抗原基因簇中都发现有假基因,而且通常是散布于有活性的功能基因之间。关于假基因的来源一般认为是由mRNA反转录成cDNA,然后整合在基因组中。假基因同cDNA一样没有内含子 ...

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Alu序列

Alu重复序列是哺乳动物基因组中SINE家族的一员,约有50万份拷贝。也就是说平均4~6 kb中就有一个Alu序列。由于这种DNA序列中有限制性内切核酸酶Alu工的识别序列AGCT,所以称为Alu重复序列。典型的人基因组Alu序列长282 bp,由两个同源但有差别的亚基构成。亚基来源于有缺失突变和点突变的7SLRNA基因。两个亚基间由腺嘌呤核苷酸密集的序列连接。右边的亚基中有无关的31 bp插入片 ...

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DNA复制起点

不论细胞中只含有一条染色体(原核生物)还是有多条染色体,细胞每次分裂时每一条染色体都要精确地复制一次,也就是构成染色体的DNA分子要复制一次。复制时,双链DNA分子的每一条单链成为新生成的DNA单链的模板链,即新合成的DNA双链分子中,一条单链是原来的亲链,另一条单链是新合成的子’链,这就是DNA的半保留复制。发生复制的单个DNA单元称为复制子(repli—con)。每个复制子在每次细胞分裂期间只 ...

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滚环式复制(rolling circle replication)

滚环式复制(rolling circle replication)是噬菌体中常见的DNA复制方式。滚环式复制的一个特点是以一条环状单链DNA为模板,进行新的DNA环状分子合成。噬菌体的双链DNA环状分子先在一条单链的复制起点上产生一个切口(nick),然后以另一条单链为模板不断地合成新的单链。释放出的新合成的单链或是先复制成双链DNA,被酶切割成单位长度后,再形成环状双链DNA分子;或是释放出的新 ...

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复制叉式复制

大肠杆菌等原核生物的环状染色体DNA复制时,首先在DNA的复制起点上解螺旋。DnaB蛋白结合在复制起点处两个解旋了的单链上,分别形成两个前导链(leading strand)的引物(primer),当前导链朝正反两个方向同时延伸时,DnaB蛋白朝延伸方向作逆向移动,陆续形成后随链(laggingstrand)的引物。这是DNA双向复制的方式。在复制启动时,尚未解开螺旋的亲代双链DNA同新合成的两条 ...

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中度重复序列

  中度重复序列大致指在真核基因组中重复数十至数万(  (1)短分散片段(short interspersed repeated segments SINES)这类重复顺序的平均长度约为300bp(〈500bp),它们与平均长度约为1000bp的单拷贝顺序间隔排列。拷贝数可达10万左右。如Alu家族,Hinf家族等属于这种类型的中度重复序列。  (2)长分散片段(Long interspersed ...

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肺炎球菌转化实验

肺炎球菌(Diplococcuspneumonoae)有许多不同的菌株(strains),但只有光滑型(S)菌株能引起人的肺炎和小鼠的败血症(septicemia)。这种菌株的细菌细胞外面有多糖类的胶状荚膜保护层,使它们不会被宿主的防御机制所破坏。当这种细菌生长在合成培养基上时,每个细菌长成一个明亮、光滑的菌落。其他一些菌株没有荚膜,不会引起疾病,长成粗糙型(R)菌落。英国卫生部病理学实验室的Fr ...

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噬菌体感染实验

噬菌体T2有一个蛋白质的外壳,DNA裹在其中。当噬菌体T2感染大肠杆菌时,它的尾部吸附在菌体上。然后,菌体内形成大量噬菌体,菌体裂解后,释放出几十个乃至几百个与原来感染细菌一样的噬菌体T2。 构成蛋白质的氨基酸中,甲硫氨酸和半胱氨酸含有硫,DNA中不含硫,所以硫只存在于T2噬菌体的蛋白质。相反,磷主要存在于DNA中,至少占T2噬菌体含磷量的99%。Alfed Hershey和Martha C ...

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超基因

操纵子是细菌中与同一种生化功能有关的几个基因(如控制色氨酸合成的有关基因)在基因组内聚成一簇而紧密连锁,并受一个基因调控。操纵子只在细菌中发现。在真核生物基因组内很少发现,真核生物的结构基因一般是单独调控的,但真核生物中也有称为超基因的结构。超基因(super gene)是指作用于一种性状或作用于一系列相关性状的几个紧密连锁的基因。 人类基因组的超基因如血红蛋白基因簇,位于16号染色体,跨度 ...

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高度重复序列

  高度重复序列在基因组中重复频率高,可达百万(106)以上,因此复性速度很快。在基因组中所占比例随种属而异,约占10-60%,在人基因组中约占20%。高度重复顺序又按其结构特点分为三种。(1)倒位(反向)重复序列  这种重复顺序复性速度极快,即使在极稀的DNA浓度下,也能很快复性,因此又称零时复性部分,约占人基因组的5%。反向重复序列由两个相同顺序的互补拷贝在同一DNA链上反向排列而成。变性后再 ...

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自身剪接反应

一种四膜虫Tetrahumenathermophila的两个主要rRNAs的基因和其他真核生物相类似,被转录在同一个初级转录本中。此转录本称为35S前体RNA,较小的rRNA的序列在5'侧,较大的rRNA(26S)序列则在3'侧。在编码26SrRNA序列存在一个单一的,短的(约400bp)内含子。如将这个35S前体RNA在体外温育,可以发生自动剪接作用:内含子从前体中被切出,先呈线性RNA片段,后 ...

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淀粉

淀粉是葡萄糖的高聚体,水解到二糖阶段为麦芽糖,完全水解后得到葡萄糖。淀粉有直链淀粉和支链淀粉两类。直链淀粉含几百个葡萄糖单元,支链淀粉含几千个葡萄糖单元。在天然淀粉中直链的约占22%~26%,它是可溶性的,其余的则为支链淀粉。当用碘溶液进行检测时,直链淀粉液呈显蓝色,而支链淀粉与碘接触时则变为红棕色。淀粉是植物体中贮存的养分,存在于种子和块茎中,各类植物中的淀粉含量都较高,大米中含淀粉62%~86 ...

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煤的焦化

煤的焦化也叫煤的干馏,是把煤置于隔绝空气的密闭炼焦炉内加热,煤分解生成固态的焦炭、液态的煤焦油和气态的焦炉气。随加热温度不同,产品的数量和质量都不同,有低温(500~600℃)、中温(750~800℃)和高温(1000~1100℃)干馏之分。低温干馏所得焦炭的数量和质量都较差,但焦油产率较高,其中所含轻油部分,经过加氢可以制成汽油,所以在汽油不足的地方,可采用低温干馏。中温法的主要产品是城市煤气, ...

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煤的液化

煤炭液化油也叫人造石油。煤和石油都是由C,H,O等元素组成的有机物,但煤的平均表现分子量大约是石油的10倍,煤的含氢量比石油低得多。所以煤加热裂解,使大分子变小,然后在催化剂的作用下加氢(450~480℃,12 MPa~30 MPa)可以得到多种燃料油。原理似乎简单,实际工艺还是相当复杂的,涉及裂解、缩合、加氢、脱氧、脱氮、脱硫、异构化等多种化学反应。不同的煤又有不同的要求。最近20年来美国、日本 ...

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视黄醇

视黄醇,又称维生素A,分子式:C20H30O。它是人体必需的13种维生素之一,是一种脂溶性抗氧化剂,在人体中可以维持视力并且促进骨骼成长。作为维生素A的视黄醇是全反式视黄醇,结构图如右上角的表格所示。除此之外,它还有很多顺式异构体,如2-顺式视黄醇、6-顺式视黄醇、26-二顺式视黄醇等,它们的活性都不如全反式视黄醇。理论上视黄醇有24中顺反异构体,但是由于有空间位阻作用,实际不少异构体都不存在。古 ...

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