抗体抗原实验

对于一个给定的抗原，最佳的抗体浓度依赖的抗原和抗体本身。抗原和抗体的亲和力，以及一抗与二抗的特异反应都是不同的。最优抗原和抗体浓度可通过免疫印迹实验中使用不同浓度的抗原和抗体作用确定。另外，更快和更简单的方法是进行斑点印迹实验。以下是使用超敏感信号底物进行的斑点印迹的操作方法。注：所有的抗体稀释度假定起始浓度为1 mg/mL。1. 用TBS和PBS稀释的蛋白样品，好的稀释方法是由样品中的抗原稀释浓度决定的，但是由于抗原 ...

学霸精选：ELISA视频： 抗体包被以及封闭 包被用抗原或抗体的浓度，包被的温度和时间，包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置过夜，37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的最适当浓度随载体和包被物的性质可有 ...

ELISA的原理和类型1.　ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上 ...

ELISA检测系统可谓是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在新老手操作过程中总是会出现或大或小的问题,本人在刚开始做ELISA时就面临很多困难,虽然有师兄师姐铺路,但还是常常做得一塌糊涂,比如说花板,假阳性,全显色,全部显色,显色比空白还低......自己也为此苦恼过很长一段时间,随着自己技术水平得提高,或多或少地也掌握了ELISA体系的脾气,也是熟能生巧吧,现在做方阵,做ELISA已是轻车熟 ...

学霸精选：来自nature 的精彩视频系列（一）：黏膜上的世界视频本视频来自互联网

学霸精选：贴壁细胞的培养过程：贴壁细胞（adherent cells）这类细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面,细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长，繁殖。当细胞在该表面生长后，一般形成两种形态，即成纤维样细胞性或上皮样细胞。视频本视频来自互联网

学霸精选：2D电泳第一季第一集 之 蛋白质提取篇：双向电泳（英语：Two-dimensional electrophoresis）是一种等电聚焦电泳与SDS-PAGE相结合，分辨率更高的蛋白质电泳检测技术。双向电泳后的凝胶经染色蛋白呈现二维分布图，水平方向反映出蛋白在等电点上的差异，而垂直方向反映出它们在分子量上的差别。所以双向电泳可以将分子量相同而等电点不同的蛋白质以及等电点相同而分子量不同的蛋白质分开。双向电泳是快速 ...

学霸精选：懂原理让让实验更轻松 之 ELISA 原理篇：视频本视频来自互联网

梅毒螺旋体（Treponema pallidum, TP）抗体的检测是评估TP感染的有效手段，对TP抗体的测试应该包括抗体筛查实验和对有重复反应性标本更特异的确认实验。根据《梅毒检测技术规范》要求，为了提高梅毒检测准确性，对于初筛阳性的结果，应选用不同厂家或不同方法的产品做重复试验，以提高梅毒检测的准确率。 对于TP抗体血清学检测的方法有非特异抗体检测方法、特异抗体检测方法，包含免疫印迹和FTA-ABS产品等。血清学实验室检测 ...

酶联免疫技术是将抗原抗体反应的特异性与酶促反应的专一性和敏感性结合而形成的一种方法。这是一种固相酶免疫检测技术，始创于1971年。它既可用于测定抗原，又可用于测定抗体。其敏感性高，特异性强，已成为酶免疫技术中应用最广泛的一种方法。本实验以双抗夹心法检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）为例。 【实验目的】 通过本实验的学习，了解酶联免疫吸附的基本原理及其用途，并熟悉其操作步骤与技能。 【实验原理】 酶联免疫吸附试验是以免疫学反应 ...

对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果，故可用于快速诊断，敏感性比双向扩散技术高10~15倍。 【实验目的】 通过本实验的学习，复习巩固免疫学的基本知识，了解对流免疫电泳的基本原理及其用途，并掌握对流免疫电泳的操作步骤及技能。 【实验原理】 抗原抗体在一定的pH溶液中带有电荷，在电场的作用下可发生定向移动。将抗原抗体加入pH8.6的琼脂凝胶中，抗体只带有微弱的负电荷，而 ...

1.2.1　抗体的结构抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）两种型别。五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。IgG和IgM的重链分别称为γ（gamma）链和μ（mu）链。重链和轻链 ...

一、实验原理SmIg是B细胞的抗原识别受体，也是B细胞特异的表面标志，用直接免疫荧光法可检查出SmIg。用荧光素标记的抗Ig抗体，在一定条件下与淋巴细胞混合，荧光素标记的抗Ig抗体可以与B细胞表面的Ig结合，在荧光显微镜下观察可见B细胞膜上出现荧光。此方法可用来鉴定B淋巴细胞。二、实验材料1. ICR小鼠（北京大学医学部实验动物中心提供）2. 异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗小鼠Ig抗体（购自BD公司）3. Hank's液： ...

WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与或标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。关于WesternBlot技术，我们实验 ...

近日为实验购买流式细胞术的抗体已经大鼠干扰素-γ的试剂盒，费了不少时间和精力，现将在购买过程中的一些体会总结一下，以供像我一样刚入实验室，难寻帮助的新手一些参考：1. 首先得明确要测的指标，以及测这些指标的方法，并去比较哪种方法在自己的实验条件下可行性好，最好又是最经济的。因为每个指标可能都有几种不同的方法，所以了解并去比较各种方法，可以让自己的实验方案更优化。这就要求去检索相关的文献，去了解这些方法。相应的原理基本 ...

相关专题 T细胞受体(T cell receptor，TCR)是T细胞表面特异性识别抗原和介导免疫应答的分子，是人类基因组中多态性最高的区域之一，决定着人的免疫系统如何适应环境的变化。T细胞受体库的多样性(包括基因重组以及选择性表达)直接反映了机体免疫应答的状态。 TCR可分为TCRα/β和TCRγ/δ两种类型, 外周血T细胞主要为TCRα/β的T细胞, 是介导机体特异性细胞免疫反应的主要细胞。如图1所示：TCRβ基因由可变区(V)、多变区 ...

相关专题 染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation，chip)被用来研究细胞内DNA与蛋白质相互作用，具体来说就是确定特定蛋白(如转录因子)是否结合特定基因组区域(如启动子或其它DNA结合位点)——可能定义顺反组。ChIP还被用来确定基因组上与组蛋白修饰相关的特定位点(即组蛋白修饰酶类的靶标)。一般认为这些DNA顺序在活体内与所研究蛋白结合，ChIP是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互 ...

相关专题 IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A”特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。 首先，实验最需要注意点就是抗体的性质。抗体不同和抗原结合能力也不同，免染能结合未必能用在IP反应。广州赛诚生物 ...

相关专题 一般流程 甲醛处理细胞---收集细胞，超声破碎---加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合---加入ProteinA，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合---洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物---解交联，纯化富集的DNA-片断---qPCR分析。在qPCR分析这一块，比较传统的做法是半定量-PCR。但是现在随着荧光定量PCR的普及，广州赛诚生物科技有限公司建议 ...

相关专题 HuH7细胞转入LXRα/RXRα表达质粒，并以抗LXRα抗体处理。经chip后对产物进行PCR分析。从实验结果可以明确LXRE2为与调控蛋白特异结合的位点。 标签: 广州赛诚生物 chip 转录调控 作者：广州赛诚生物 点击：次