微生物学技术

用于保存菌种及间接检查细菌有无动力。 (1)材料 半固体培养基。 细菌斜面培养物。 (2)方法 ①将接种针经火焰灭菌冷却后，从斜面培养物表面沾取细菌。 ②用无菌法穿刺接种，将接种针刺入半固体培养基正中央，深度达距管底0.5cm处停止，然后循原路退出。注意在刺入及拔出时要保持接种针不向穿刺线外摆动。 ③试管口通过火焰灭菌，塞上棉塞。接种针经火焰灭菌。培养物放37℃恒温箱中培养。 (3)结果：有动力 ...

用于纯种细菌的增菌及观察细菌在液体环境中的生长特征(混浊生长，表面生长或沉淀生长) (1)材料 肉汤培养基 斜面培养物(大肠埃希菌、化脓性链球菌、枯草芽胞杆菌) (2)方法 ①取接种环在火焰上灼烧灭菌、冷却。 ②以“双管移植法”左手持细菌斜面培养物和肉汤培养基两支试管，右手持接种环，按无菌操作法取少量细菌，将沾菌的接种环按图20-5在斜倾的接近液面的管壁上轻轻涂抹研匀，试 ...

1、斜面培养基移种技术 (1)材料 琼脂斜面培养基 经分离培养的平板培养物。 (2)方法 ①在琼脂斜面培养基试管上部标明移种的菌名(或编号)、接种日期、接种者的组别及代号。 ②左手持长有细菌的平板底，右手持接种环。接种环在火焰上灭菌冷却后，沾取平板划线上发育良好的孤立菌落。把平板放回原处，立即用此手取斜面培养基斜持，用右手小指与手掌夹持棉塞，轻轻转动后拨出棉塞，管口通过火焰灭菌。 ③将已沾菌的接 ...

1、原理与应用 结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色，若加温或延长染色时间使其着色后，再用3%盐酸酒精处理也不易脱色，经此染色后，结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色，而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。 2、材料 (1)结核病人痰 (2)抗酸染色液 (3)玻片、片夹、滤纸片、竹签、空平皿、污物盆。 3、方法 (1)取洁净的竹签沾取痰中血丝或脓性痰，在清洁无油脂玻片上涂开。涂抹区约拇指盖大。用过的竹签放到空 ...

1、材料 (1)染液甲 第一液：美兰1g，95%酒精30ml，冰醋酸50ml，蒸馏水100ml。 第二液：结晶紫1g 95%酒精10ml 蒸馏水300ml。 以上第一液二份，与第二液一份混合之。 (2)染液乙，黄叱精1或2g，热蒸馏水300ml，待溶解后过滤。 2、染色法 (1)涂片按常规法固定后，滴加奈瑟染液甲液数滴于涂片上，15～30 Sec，水洗。 (2)用奈瑟染液乙液复染10～30秒钟。 ...

一、目的要求 1、掌握各种分离、接种方法。 2、掌握无菌操作基本环节。 二、实验说明 微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移 ...

实验原理 稀释平板测数是根据微生物在高度稀释条件下固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的繁殖稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使其成单个细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个细胞，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落， ...

实验原理 有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。 细菌产生的脂肪酶能分解培养基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培养基pH下降，可通过在油脂培养基中加入中性红做指示剂进行测试。中性红指示范围为pH6.8（红）～8.0（黄）。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则菌落周围培养基中出现红色斑点。 某些细菌分泌蛋白酶分解明胶，产生 ...

实验原理 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺（图示）是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上，此处正好与物镜放大的中间物像重迭，用于测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺 ...

实验材料 1、活材料：培养3d的黑曲霉（Aspergillus niger）、根瘤菌（Rhizobium sp.）、培养24h的大肠杆菌（E. coli）、巴斯德梭菌（Clostridium pasteurianum）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、培养5d的吸水链霉菌“5102”（Sterptomyces hygroscopicus “51 ...

1. 75cm2方瓶中接种 293 细胞，至密度达到 90%，加入适量病毒上清感染细胞。 3- 4d 后，细胞几乎变圆，且有一半细胞漂浮，则收集所有细胞。约500g 转速离心，弃上清。 2. 以灭菌 PBS 重悬沉淀，反复冻融4 次。4℃下 7000g 离心 5min.病毒纯化至少 需要 30 瓶 75cm2方瓶细胞。 3. CsCl 连续梯度离心纯化：50ml 离心管中称量 4.4g CsCl ...

1. 准备 NZY agar plates（至少用前 24 小时倒好） ，用前在37℃培养箱中烘烤1-2 小时以去除水滴。 2. 将过夜培养的 XL1-blueMRF' 细菌 2000 转/ 分，离心10 分钟，将细菌溶解在10mMMgSO4 中，调整细菌浓度为 OD600=0.5。 3. 融化 NZY top，并将 NZY top 放在 50℃水浴中。 4. 将适量的 XL1-blue ...

一、对象与方法 1. 监测对象 电子阅览室2个、学生食堂3个、教室6个、学生宿舍10个(其中女生宿舍5个、男生宿舍5个)、学生实验室4个。 2. 采样点设置 按照《室内空气质量标准》(GB/T188832002)的要求进行。每个监测目标设置5个采样点即室内墙角对角线交点为一采样点，该交点与四墙角连线的中点为另外4个采样点。采样高度为1.5 m.采样点应远离墙壁1m以上并避开空调、门窗等空气流通 ...

λ噬菌体是最早使用的克隆载体，λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子，它在宿主细胞有两种生活途径，其一是裂解生长，环状DNA分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次感染；其二是溶源性生长，即感染细胞内λ噬菌体DNA整合到宿主菌染色体DNA中与之一起复制，并遗传给子代细胞，宿主细胞不裂解。平板培养 ...

传统的空斑实验方法测呼吸道合胞病毒的PFU值由于其空斑形成较小且需要借助特异性的表面融合蛋白抗体来确定故操作繁琐费用较高。这里介绍给大家三种简单易行的空斑形成实验操作方法： 方法一 1、以5×10e5/ml的密度接种Hep－2细胞到6孔板中，每孔加入3ml细胞悬液； 2、待细胞长成单层后（不得超过48hr），移去营养液，每孔加入400ul的PBS和100ul毒液（10倍系列稀释）； ...

1、铺平板感染培养物的制备： 对直径为10cm的培养皿，取105pfu的噬菌体（通常约为一个噬菌斑重悬液的1/10或一个大噬菌斑重悬液的1/100）与0.1ml铺平板细菌混匀。 对直径为15cm的培养皿，去2×105pfu的噬菌体与0.2ml铺平板细菌混匀。 至少要置一个含为感染细胞的对照管，将感染培养物和对照均置于37℃培养20min，将病毒吸附到细胞上。 如果制备不易生长的&la ...

一、慢病毒的储存与稀释： 1. 病毒的储存：用户收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口） 注：A．病毒可以存放于-80℃ 6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，我们建议在使用前需要重新滴定病毒滴度 B．反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应尽量避免反复冻 ...

一、慢病毒包装简介及其用途 慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干 ...

一 目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例） 1. 选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。 2. 重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。 3. 重组质粒扩增，纯化并 ...

一旦重组病毒已被纯化和鉴定，即可在293 细胞中进行大量扩增。本手册提供了递增培养规模和腺病毒感染周期的基本方法，按这一方法最终得到的病毒量约为3×1011～3×1012。由于一个细胞中所含的病毒颗粒为1000～10000，因此1L 培养细胞可得到约5×1012 病毒颗粒。如果要把病毒用氯化铯梯度离心纯化，则必须至少3×108 的细胞，这样才能正确 ...