免疫学技术

酶联免疫斑点（ELISPOT）技术是当今世界上检测生物体细胞免疫水平的最佳技术。它集高灵敏度、高可信度、高通量、单细胞水平、功能性检测与低成本等诸多优点于一身，在国内外免疫学界获得了广泛的应用，成为主流免疫学检测技术之一。我们来一一详述这些优点。 l 灵敏度高 理论上，ELISPOT高达百万分之一，也 ...

为了实现ELISPOT的标准化，显色最好在恒温箱内进行，温度控制在25°C±5°C，显色25分钟为宜。另外，在37°C显色也是不错的一个方法，但要注意相应的缩短显色时间到12-18分钟，并且显色中勤检查。为了提高ELISPOT检测结果的可重复性，增加实验的可信度，必须建立一套标准化的实验操作规范。标准化的实验操作规范不仅仅是一些实验操作，更是一个系统工程，需要 ...

第一天：ELISPOT包被程序，提供两种方案供选择（严格注意无菌操作）方案A: 传统酒精预湿包被程序该方案中，需经过：70％乙醇预湿PVDF膜、无菌去离子水洗涤去除乙醇、拍干，最后，加入已稀释好的包被抗体到各实验孔完成包被操作。具体操作如下：1. 实验卡片填写：设计好试验，把每个 ...

图注：ELISPOT 法在检测低频率产生细胞因子的细胞时具有独一无二的敏感性。将指定数目的能产生 IFN- 的T细胞与一百万个抗原呈现细胞（Antigen Presenting Cells，APC）混合后，使用 ELISPOT 法（上图）、胞质内染法（中图）和 ELISA 法（下图）分别测量产生 IFN- 的细胞的数目。 •ELISPOT 分析使单细胞分泌产物可视化。这些分析 ...

ELISPOT技术简介　随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法（ ELISA ）检测体液中游离的细胞因子（ CK ）或抗体，但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同，使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合，而不能确切的反映体内的抗体及 CK 的水平。 80 年代，国外的科研工作者 ...

一、原理 可溶性抗原（或抗体）吸附于免疫学反应无关的颗粒（称为载体）表面上，当这些致敏的颗粒与相应的抗体（或抗原）相遇时，就会产生特异性的结合，在电解质参与下，这些颗粒就会发生凝集现象。这种借助于载体的抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应(Indirect agglutination reaction)。 载体的存在使反应的敏感性得以大大提高。间接凝集反应的优点为：①敏感性强：间接凝集反应是最敏 ...

颗粒性抗原（细菌、螺旋体、红细胞等）与相应的抗体血清混合后，在电解质参与下，经过一定时间，抗原抗体凝聚成肉眼可见的凝集块，这种现象称为凝集反应。血清中的抗体称为凝集素（Agglutinin），抗原称为凝集原（Agglutinogen）。 细菌或其他凝集原都带有相同的电荷（阴电荷），在悬液中相互排斥而呈均匀的分散状态。抗原与抗体相遇后，由于抗原和抗体分子表面存在着相互对应的化学基团，因而发生特异性 ...

ELISPOT 技术简介 ...

凝集反应是原生动物等颗粒抗原或表面覆盖抗原的颗粒状物质（如聚苯乙烯胶乳、炭素等），与相应抗体在电解质存在下的成团作用而引起的。在原虫等颗粒性抗原与相应抗体所产生的凝集反应中，参与反应的抗原称凝集原，抗体称为凝集素。 凝集反应的种类很多，但用于寄生虫病免疫反应诊断的凝集试验主要包括直接凝集试验和间接凝集试验，其共同特征是操作简便，反应快速，敏感性高；缺点是容易发生非特异性反应。所以在做凝集试验时，必 ...

一抗从4度拿出后，为什么有人说要37度复温，目的是什么？（1）一方面，防止切片从4度直接放入PBS易脱片；（2）另一方面，使抗原抗体结合更稳定。一般不需要但对表达较弱的抗原可能有用4度和37度时分子运动方式不同前者分子碰撞机率和运动速度小于后者后者结合更快但敏感性也提高了并易造成非特异染色。（3）其实，我更赞同后一种说法，因为我尝试把肝脏或睾丸片子从4度过夜拿出后，直接用PBS洗没发生过 ...

良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果，因此，要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题，但从染色的结果看，一般可分为两类：无色片（即无阳性信号）和“杂音 ...

一、概况　　噬菌体展示技术（Phage Display Technology）在80年代中期产生， Smith G第一次描述了在丝状噬菌体表面展示外源多肽片段的原理。该办法主要是用DNA重组技术将大量的多肽编码顺序导人噬菌体的衣壳蛋白基因中，从而使表达出的各种多防以与PIII或PVIII蛋白融合的形式出现在噬菌体的表面，即首先构建噬菌体多肽展示文库。10多年来在构建噬菌体展示多肽文库方面以及用生物 ...

自Nakane(1966)建立了免疫酶标记技术以来，这门技术得到了迅速的发展。DAKOEPOS先进的多聚螯合物免疫组化一步染色法，是一种即用型快速而有效的方法，具有更为简便、更为敏感和高特异性的特点。 1.材料和方法 1.1 材料 均为本院日常活检组织共32例，其中肉瘤5例，淋巴瘤7例，上皮癌12例，胶质瘤8例。用10％甲醛固定，常规脱水、包埋、切片。 1.2 试剂 EPOS- ...