蛋白质技术

SDS-PAGE: gel electrophoresis of proteinsTECHNIQUE is to set up gel plates before you mix the gel mixes. Use the THIN spacers and choose a comb--number of wells varies. Make both resolving gel and sta ...

1. To use commercial BRL boxes: Clean the plates with soap and hot water wipe dry scrub with ethanol wipe dry and clamp them together with spacers in between. The notched spacers interlock to form a t ...

1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时预电泳是怎么回事的？预电泳时要加6×DNA上样缓冲液吗？电泳1－2小时再加结合反应产物吗？ 预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂，提高分辨率，不加任何物质，一般３０－６０分钟后加样电泳。 2. 银染的步骤是什么？银染的关键因素是什么？ 步骤是： （1） 固定：10%冰乙酸30min。 （2） 清洗：双蒸水冲洗凝胶2次，每次1min。 （3） ...

非变性凝胶电泳，也称为天然凝胶电泳，与非变性凝胶电泳最大的区别就在于蛋白在电泳过程中和电泳后都不会变性。最主要的有以下几点： 1. 凝胶的配置中非变性凝胶不能加入SDS，而变性凝胶的有SDS。 2. 电泳载样缓冲液中非变性凝胶的不仅没有SDS，也没有巯基乙醇。 3. 在非变性凝胶中蛋白质的分离取决于它所带的电荷以及分子大小，不像SDS-PAGE电泳中蛋白质分离只与其分子量有关。 4. 非变性凝胶电 ...

1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，蛋白质的迁移率不仅和蛋白质的等电点有关，还和蛋白质的分子量以及分子形状有关，其中蛋白质的等电点是最重要的影响因子，要根据蛋白质的等电点来选择对应的电泳缓冲系统； 2. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，要注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性，所以最好在电泳槽外面放置冰块以降低温度； 3. 蛋白质的分子量较大，则电泳时间可以适当延长，以使目的蛋白质有足够的迁移 ...

非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性sds-page电泳在操作上基本上是相同的，只是非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS等。一般蛋白进行非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性蛋白。分离碱性蛋白时候，要利用低pH凝胶系统，分离酸性蛋白时候，要利用高pH凝胶系统。酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境 ...

1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响？ 在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高 ...

SDS-PAGE因易于操作，而具有广泛的用途，是许多研究领域的重要的分析技术。 1. 蛋白质纯度分析； 2. 蛋白质分析量的测定，根据迁移率大小测定蛋白质亚基的分子量； 3. 蛋白质浓度的测定； 4. 蛋白质水解的分析； 5. 免疫沉淀蛋白的鉴定； 6. 免疫印迹的第一步； 7. 蛋白质修饰的鉴定； 8. 分离和浓缩用于产生抗体的抗原； 9. 分离放射性标记的蛋白质； 10. 显示小分子多肽。 ...

聚丙烯酰胺的特性，包括机械性能，弹性，透明度，孔径大小取决于T，C，T是两个单体(单体丙烯酰胺和N-N’-甲叉双丙烯酰胺)的总百分浓度，C是与总浓度有关的交联百分比浓度。 T=(a+b)/m C=b/(a+b) （a为单体丙烯酰胺的克数，b为N-N’-甲叉双丙烯酰胺的克数，m为缓冲液终体积） a，b的比例很关键，如果a:b 小于10，胶脆，硬 如果a ...

1. 带电颗粒的性质 净电荷多少、颗粒大小及形状。一般净电荷多，直径小而且近于球状，则泳动速度快，反之则慢。 2. 电场强度（电位梯度） 指单位长度（cm）支持物体上的电位降，它对泳动度起着十分重要的作用。一般电场强度越高，带电颗粒移动速度越快。根据电场强度可将电泳分为低压（常压）电泳100—500V，电场强度为2—10V/cm，分离时间需要数小时、数天或更长。高压电泳50 ...

试剂： 1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml 1mol/l的Tris-HCl(pH6.8)5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。 2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。 3. ...

当需要较高的收率时，尤其当研究的样品对象在微克范围时，建议应考虑以下几点： 1.根据样品处理量，选择最小可用的超滤容器，在小容器中反复添加样品，反复超滤。 2.在适量范围内，选截留分子量最低的超滤膜。 3.如可能，使用水平转头代替角转头离心，这样可减少在离心过程中溶液与离心管接触的表面积。 4.将压力或离心力降低到大约最大推荐数值的一半。 5.避免过度浓缩，最终体积越小，越难得到完全回收，如可能， ...

超滤透过通量的影响因素如下： 1.料液流速 提高料液流速虽然对减轻浓差极化、提高透过通量有利，但需要提高料液压力，增加耗能。一般紊流体系中流速控制在1-3m/s。 2.操作压力 超滤膜透过通量与操作压力的关系取决于膜和凝胶层的性质。超滤过程为凝胶化模型，膜透过通量与压力无关，这时的通量成为临界透过通量。实际操作压力应在极限通量附近进行，此时的操作压力约为0.5-0.6Mpa。 超滤过程中只有当 ...

超滤技术的关键是膜。膜有各种不同的类型和规格，可根据工作的需要来选用。早期的膜是各向同性的均匀膜，即现在常用的微孔薄膜，其孔径通常是0.05 μm ～1.0μm。近几年来生产了一些各向异性的不对称超滤膜，其中一种各向异性扩散膜是由一层非常薄的、具有一定孔径的多孔“皮肤层”（厚约0.1m和0.025 mm），和一层相对厚得多的（约1m）更易通渗的、作为支撑用的&l ...

1. 配料； 2. 检查出口阀门是否关闭，搅拌料浆； 3. 启动泵，打开出口阀，开始超滤； 4. 改变压力，观察不同压力对超滤的影响； 5. 配制不同浓度的悬浮液进行超滤，观察悬浮液浓度对超滤的影响； 6. 关闭泵，结束实验。 ...

超滤装置是在一个密闭的容器中进行，以压缩空气为动力，推动容器内的活塞前进，使样液形成内压，容器底部设有坚固的膜板。小于膜板孔径直径的小分子，受压力的作用被挤出膜板外，大分子被截留在膜板之上。超滤开始时，由于溶质分子均匀地分布在溶液中，超滤的速度比较快。但是，随着小分子的不断排出，大分子被截留堆积在膜表面，浓度越来越高，自下而上形成浓度梯度，这日才超滤速度就会逐渐减慢，这种现象称为浓度极化现象。为了 ...

超滤原理 超滤（Ultrafiltration）技术是一种膜滤法，也有错流过滤（Cross Filtration）之称。它能从周围含有微粒的介质中分离出10～100A的微粒，这个尺寸范围内的微粒，通常是指液体内的溶质。其基本原理是在常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜介质，依靠膜两侧的压力差作为推动力，以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，大分子物质和微粒子如蛋白质、水溶性高聚 ...

1) grow 20ml cells O/N 37 C dilute 50X into prewarmed LB grow to 0.6 OD or about 1hr. Induce w/ 2mM IPTG (238mg/0.5l) grow 3hr spin 6k GS3 10' freeze at -70 ℃. 2) resuspend cells (from 500ml) in flipt ...

Bases Buffer is Buffer C (as per Schroter)(as per SRF)pg.27 20mM Hepes pH 7.9 0.1% NP40 0.2mM EDTA 20% glycerol Lysis Buffer: 0.75M KCl Need buffers containing 00.1M0.6M & 1.0M KCL in addition to ...

1.Add 222.2μl 1M MOPSpH 7.5 to 2ml of 10mg of CREBtide (0.1M MOPS pH 7.5 final concentration). 2.Read OD205OD280 (using 0.1M MOPS buffer as blank) 3.Affigel-10 is stored frozen at < -70℃.Thaw at ...