蛋白质技术

心肌肌浆网钙-ATP酶(SERCA2a)在心肌细胞内的钙稳态调控中起主要作用对SERCA2a在IPC过程中基因转录调控的研究有可能从基因表达调控层面揭示SERCA2a在IPC中的作用和机制。 ...

心肌肌浆网钙-ATP酶(SERCA2a)在心肌细胞内的钙稳态调控中起主要作用对SERCA2a在IPC过程中基因转录调控的研究有可能从基因表达调控层面揭示SERCA2a在IPC中的作用和机制。 ...

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谷胱甘肽S-转移酶是指催化具有亲电取代基的外源性化合物与内源的还原谷胱甘肽(GSH)反应的酶。 可催化多种反应包括烃基、芳基、芳烃基、烯基和氧基的转移反应。 谷胱甘肽S-转移酶是谷胱甘肽结合反应的关键酶，催化谷胱甘肽结合反应的起始步骤，主要存在于胞液中。谷胱甘肽S-转移酶有多种形式，根据作用底物 不同，至少可分为下列5种： 1、谷胱甘肽S-烷基转移酶：催化烷基卤化物和硝基烷类化合物 ...

氨基比林又名匹拉米洞， Pyramidon Amidozon Aminophenazon Aminopyrine，由氨基安替比林经催化氢化（烃化）而得， 解热镇痛作用较强，缓慢而持久，消炎抗风湿作用与阿司匹林相似。本品因能引起骨髓抑制以及能形成亚硝胺致癌物质，故单用制剂已淘汰。临床常用的是其复方制剂。但是可引起粒细胞减少。长期服用含本品药物，可引起中毒应定期检查学象。偶有皮疹和剥脱性皮炎。在胃酸条 ...

肝脏的细胞色素P450系统在药物的代谢中起着重要作用，它将药物由疏水型转化为更易排泄的亲水型。生物转化反应一般可分为细胞色素P450依赖的I相和II相结合反应。最近几年内已清楚药物的肝外代谢对体内药物总的降解起一定的作用。胃肠道内的生物转化是非常重要的，因为它可降低口服药物的生物利用度。遗传多态性、酶抑制、酶诱导及生理因素均可引起细胞色素P450活性的改变。这有一定的临床含意，因为这会引起药物药 ...

细胞色素b5存于高等动物内质网膜的一种细胞色素。可从兔肝微粒体中提纯。因为与膜结合，用蛋白酶或表面活性剂处理可以使其溶解。还原型和氧化型的最大吸收光谱分别为555、526、423和414毫微米，分子量为12，500，氧化还原电位＋0.02V。可由同样内质网膜内的还原酶通过NADH进行还原。还原型b5与被称为氰感受因子的酶一起，参与由氧将饱和酰基辅酶A转变成不饱和酰基辅酶A的脂肪酸不饱和化反应。 ...

细胞色素P450（cytochromeP450或CYP450，简称CYP450）为一类亚铁血红素—硫醇盐蛋白的超家族，它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢。 细胞中，细胞色素P450主要分布在内质网和线粒体内膜上，作为一种末端加氧酶，参与了生物体内的甾醇类激素合成等过程。近年来，对细胞色素P450的结构、功能特别是对其在药物代谢中的作用的研究有了 ...

Lowry比色法是蛋白质测定最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。Folin— ...

金属硫蛋日(metallothionein，MT)是富含金属及硫的可诱导性蛋白，它可被某些金属( Bi，Zn，Cu等)、激素（糖皮质激素）、细胞毒药物（顺铂及烷化剂）及其他与物理化学刺激相关的病理生理状况所诱导。MT广泛存在于哺乳娄动物除结缔组织外的几乎所有组织中，肝、肾、胰、肠中最为丰富，从已有的研究中发现：MT增加可介导肿瘤细胞对烷化剂及DDP产生耐药性。耐DDP的细胞MT含量增加且MT mR ...

生命活动与蛋白质的动态变化密切相关 很多情况下某些蛋白质是通过各种翻译后修饰来完成或改变其功能。在数量众多的蛋白质翻译后修饰中，蛋白质磷酸化修饰无疑是最重要的一类，它是指通过蛋白激酶（Protein kinase，PK）介导的酶促反应把磷酸基团从一个化合物转移到另一个化合物上的过程（Figure 1所示），是生物体内存在的一种普遍的调节方式。现今发现的所有人类蛋白质中超过30%可被磷酸化修饰，这 ...

Wayne F. Patton Ph.D. Keywords: 聚集、生物工艺、蛋白疗法、生物治疗 蛋白聚集严重影响以蛋白为基础研发的药物。在药物制剂中，蛋白聚集在生物活性和免疫原性方面影响药效。 蛋白聚集发生在生产过程的各个阶段包括细胞培养、纯化、生产、储存、运输等方面。制药工业希望在生物工艺中找到新的方法，可用于检测、追踪、定量分析影响蛋 ...

一、实验目的 掌握测定尿素酶活性的各种方法的基本原理及方法步骤。 二、实验原理 将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量的盐酸溶液中和所产生的氨，再用氢氧化标准溶液回滴。 三、实验设备 1、样品筛：孔径200μm； 2、酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置； 3、恒温水浴：可控温30& ...

基本原理 分离纯化蛋白质，首先要从原材料中提取目的蛋白，然后通过粗分离的方法除去大量杂质，最后进行精细分离，得到目的蛋白。本实验以新型基因重组人TNF为例阐明重组蛋白TNF的提取及初步分离。 TNF的提取是将发酵菌体裂解，在一定的条件和溶液中，使被提取的TNF充分释放出来，经离心收集混合液中提取的TNF成份的过程。含有TNF的提取溶液中，含有大量的杂蛋白，由于蛋白质在水溶液中的溶解 ...

酶法组织消化中常用的胶原酶（Collagenase），能特异性地降解胞外胶原蛋白，使胶原蛋白和纤维粘连蛋白的网状结构解离，而不损坏细胞表面结构的完整性。由于细胞外基质的成分复杂，除胶原蛋白外，还含有弹性蛋白，糖蛋白等其他大分子结构。而且不同组织类型，不同物种来源，不同年龄的组织中胞外基质组份不同。所以商业化的胶原酶产品一般是梭状芽孢杆菌裂解液的粗提物，是胶原酶、胰蛋白酶等蛋白水解酶混合物，能降解 ...

基本原理 离子交换色谱是将离子交换基因（CM、SP、Q、DEAE等）键合于一定的惰性载体（纤维素、交联葡聚糖，交联琼脂糖等）之上，并以此作为固定相，依据样品所带电荷的不同，从而与固定相上的离子交换基团相互作用的程度不同而进行分离的一种色谱方法。离子交换色谱技术已广泛用于蛋白质、多肽、寡核苷酸、病毒、噬菌体、多糖等的纯化。 离子交换剂是在载体上键合了一些离子交换基团，而离子交换基团在 ...

反相色谱（reversed phasc chromatography RPC）是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式，任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分，这部分越大，一般保留值越高，在高效液相色谱中这是应用面最广的一种分离模式，在生物大分子的反相液相色谱条件下，流动相多采用酸性的、低离子强度的水溶液，并加一定比例的能与水互溶的异丙醇、乙腈或甲醇等有机改性 ...

高效液相色谱（High Rerformance Liquid Chromatography HPLC）又叫高压、高速、近代液相色谱，通常叫做高效液相色谱。它是60年代中期才建立的一种高效快速分离化合物的方法，到了70年代后期才广泛用于蛋白质的分离纯化方面，现已成为分离纯化蛋白质非常有效的方法之一。和经典常压色谱相比它有以下特点：1、HPLC分离、纯化蛋白质的速度快。通常半小时左右可进行一次，大大 ...

固相肽合成（solid phase peptide synthesis SPPS）技术是现代蛋白质化学的一项关键技术，也是对现代分子生物学和基因工程研究具有重大影响和重要意义的技术。它的基本过程为：1、偶联保护氨基，即将第一个保护氨基以共价键偶联外固相载体上（在合成过程中始终不能脱落）。2、脱保护，在侧键基团保持稳定条件下脱去氨基上的保护，暴露出自由氨基，例如脱去Fmoc。3、偶联，将下一个已活 ...

基本原理 TNF的生物学活性之一是能直接杀伤肿瘤细胞。TNF与相应受体结合后向细胞内移，被靶细胞溶酶体摄取导致溶酶体稳定性降低，各种酶外泄，引起细胞溶解。肿瘤细胞株对TNF-α的敏感性有很大的差异，用放线菌素D、丝裂酶素C、放线菌酮等处理肿瘤细胞，可明显增强TNF-α杀伤肿瘤细胞活性。 材料和试剂 1，完全培养基（1）10%FCS-DMEM培养液（V/V）。 ...