蛋白质技术

由电泳迁移率的公式可以看出，影响电泳分离的因素很多，下面简单讨论一些主要的影响因素： 1. 待分离生物大分子的性质 待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说，分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。 2. 缓冲液的性质 缓冲液的pH值会影响待分离生物大分子的解离程度，从而对其带电性质产 ...

简介 1809年俄国物理学家Рейсе首次发现电泳现象。他在湿粘土中插上带玻璃管的正负两个电极，加电压后发现正极玻璃管中原有的水层变混浊，即带负电荷的粘土颗粒向正极移动，这就是电泳现象。 1909年Michaelis首次将胶体离子在电场中的移动称为电泳。他用不同pH的溶液在U形管中测定了转化酶和过氧化氢酶的电泳移动和等电点。 1937年瑞典Uppsala大学的Tise ...

一、凝胶制备 1. 微波炉溶解琼脂糖时，胶液沸腾冲溢出三角锥瓶微波炉加热时胶液可能发生剧烈沸腾， （1）总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。 （2）2%以上胶液设置中火加热。 （3）胶液剧烈沸腾时，停止加热，移开三角锥瓶，请戴上防热手套，小心摇动三角锥瓶，然后再次加热，胶液沸腾直至胶液清澈，保证琼脂糖完全溶解。 2. 琼脂糖电泳图像背景模 ...

一、实验原理 琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA片段的常用技术。把DNA样品加入到一块包含电解质的多孔支持介质（琼脂糖凝胶）的样品孔中，并置于静电场上。由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应。具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样，因而可依据DNA分子的大小来使其分离。 凝胶电泳不仅可分离 ...

一、琼脂糖凝胶的特点 天然琼脂（agar）是一种天然多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80%）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点 ...

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。 原理 琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。 琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力， ...

肽的溶解性 根据经验，溶解肽是一个很重要的环节。如果溶解不当可能导致肽损失或者实验失败。肽的溶解性主要取决于肽的序列，所以，如果实验允许，肽序列中至少应包含20%的带电残基以增加其溶解度。 在使用之前，客户可以遵循以下三个基本原则来选择合适的溶剂溶解多肽。首先，所选溶剂一定能充分溶解多肽。其次，所选溶剂能与实验条件兼容，最后，所选溶剂不能与肽反应，也不能使肽降解。只要肽的量允许，可 ...

X-射线衍射法是测定蛋白质晶体结构的极其重要方法。生物大分子X射线晶体学是揭示分子结构与功能的科学。目前还没有一种工具能够用它直接观察到蛋白质内部的原子和基团的排列。虽然电子显微镜接近于看到大分子的轮廓。但是仍然仅限于揭露分子的大小、形状、对称性和聚集状态等。通过X-射线衍射法（X-ray diffraction method）可间接地研究蛋白质晶体的空间结构。对晶体结构的研究将帮助人们从原 ...

使用油脂介孔膜蛋白结晶的一个详细的协议描述。这种方法有不同的被称为油脂立方相， 或在中观方法。该方法已被证明是相当通用的，因为它已被用于解决X射线晶体结构的原核和真核细胞的蛋白质，蛋白质是单体，同源异多聚体，生色含和生色，和alpha螺旋和β-管蛋白。最近取得的成功观的结晶，是人类设计的β2-肾上腺素和腺苷A2A G蛋白偶联受体。协议提出的重组膜蛋白的monoolein为基础 ...

超氧化物歧化酶同工酶是指催化超氧化物自由基氧离子和氢离子反应形成过氧化氢和分子氧反应，但分子结构与超氧化物歧化酶不同的酶。 超氧化物歧化酶同工酶活性测定方法有：化学发光免疫法、化学法、亚硝酸法，下面简单介绍亚硝酸法测定其活性的原理、操作步骤以及注意事项。 图1 亚硝酸法原理 图2 亚硝酸法操作步骤 ...

超氧化物歧化酶同工酶是指催化超氧化物自由基氧离子和氢离子反应形成过氧化氢和分子氧反应，但分子结构与超氧化物歧化酶不同的酶。 超氧化物歧化酶同工酶活性测定方法有：化学发光免疫法、化学法、亚硝酸法，下面简单介绍化学法测定其活性的原理、操作步骤以及注意事项。 图1 化学发光法原理 图1 化学发光法操作步骤 ...

超氧化物歧化酶同工酶是指催化超氧化物自由基氧离子和氢离子反应形成过氧化氢和分子氧反应，但分子结构与超氧化物歧化酶不同的酶。 超氧化物歧化酶同工酶活性测定方法有：化学发光免疫法、化学法、亚硝酸法，下面简单介绍化学发光免疫法测定其活性的原理、操作步骤以及注意事项。 图1 化学发光免疫法原理 图1 化学发光免疫法原理 ...

极谱法(polarography)通过测定电解过程中所得到的极化电极的电流-电位（或电位-时间）曲线来确定溶液中被测物质浓度的一类电化学分析方法。于1922年由捷克化学家J.海洛夫斯基建立。极谱法和伏安法的区别在于极化电极的不同。极谱法是使用滴汞电极或其他表面能够周期性更新的液体电极为极化电极；伏安法是使用表面静止的液体或固体电极为极化电极。 ...

邻苯三酚是白色有光泽结晶体，无味，在露光的空气中变成淡灰色，慢慢加热开始升华。密度1．45g／cm3。熔点13l-133℃．沸点309℃。易溶于水、醇、醚，水溶液在空气中逐渐变暗，在碱性溶液中迅速变暗，微溶于苯、氯仿、二硫化碳。剧毒！对皮肤、粘膜的刺激性极强。 主要用于制备金属胶状溶液、电影胶片显影剂、红外线照相热敏剂、苯乙烯和聚苯乙烯阻聚剂。也是染料和医药的中间体。作为化学试剂， ...

邻苯三酚是白色有光泽结晶体，无味，在露光的空气中变成淡灰色，慢慢加热开始升华。密度1．45g／cm3。熔点13l-133℃．沸点309℃。易溶于水、醇、醚，水溶液在空气中逐渐变暗，在碱性溶液中迅速变暗，微溶于苯、氯仿、二硫化碳。剧毒！对皮肤、粘膜的刺激性极强。 主要用于制备金属胶状溶液、电影胶片显影剂、红外线照相热敏剂、苯乙烯和聚苯乙烯阻聚剂。也是染料和医药的中间体。作为化学试剂， ...

氯化硝基四氮唑蓝，黄色粉末 溶于水，溶于甲醇。易吸湿。溶于水和乙醇，微溶于乙酸乙酯，不溶于乙醚。其还原物（Diformazan）为黑紫色结晶性粉末，溶于多数有机溶剂。有毒。有致癌的可能性。它是脱氢酶和其它过氧化酶的底物。用于测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase）；也是凝血因子I（fibrinogen）的沉淀试剂。也是碱性磷酸酶底物之一，在碱 ...

肾上腺素是由肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺激素。在应激状态、内脏神经刺激和低血糖等情况下，释放入血液循环，促进糖原分解并升高血糖，促进脂肪分解，引起心跳加快。肾上腺素（adrenalineepinephrineAD）是肾上腺髓质的主要激素，其生物合成主要是在髓质铬细胞中首先形成去甲肾上腺素，然后进一步经苯乙胺-N-甲基转移酶（phenylethanolamine N-methyl transfer ...

化学发光现象是一种常见的自然现象，利用化学发光测定化学发光反应反应物、催化剂、增敏剂、抑制剂，偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂的方法叫做化学发光法。化学发光是物质在化学反应过程中，其物质分子吸收化学能产生光的辐射现象。 ...

单胺氧化酶(monoamine oxidase )为催化单胺氧化脱氨反应的酶。缩写MAO，也有称为含黄素胺氧化酶的。 EC1．4．3．4。作用于一级胺及其甲基化的二、三级胺，也作用于长链的二胺。对所谓生物胺，即酪胺、儿茶酚胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、肾上腺素等也有作用。可使儿茶胺类神经递质失活的酶，可用作抗抑郁征药物。高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromat ...

单胺氧化酶(monoamine oxidase )为催化单胺氧化脱氨反应的酶。缩写MAO，也有称为含黄素胺氧化酶的。 EC1．4．3．4。作用于一级胺及其甲基化的二、三级胺，也作用于长链的二胺。对所谓生物胺，即酪胺、儿茶酚胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、肾上腺素等也有作用。可使儿茶胺类神经递质失活的酶，可用作抗抑郁征药物。 同位素是同一元素的不同原子，其原子具有相同数目的质子，但中子数目却不同（例如 ...