蛋白质技术

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相关专题 近年来，绿色荧光蛋白的研究越来越受到科研工作者的重视和看好，相关的成果不断见诸各个期刊。今年头中科院生物物理所就联合北京大学通过实验获得了一系列的绿色荧光蛋白。那么，绿色荧光蛋白的前世今生有怎样的故事呢? 2008年10月8日，诺贝尔化学奖揭晓。日本科学家下村修、美国科学家马丁•查尔非和钱永健因发现和改造绿色荧光蛋白(G ...

相关专题 在动物胰脏中除了存在胰蛋白酶外，还有另外两种与胰蛋白酶性质相似的蛋白水解酶：胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶。在胰蛋白酶提取过程中，三者彼此很难分开。需采用合适的方法进一步分离纯化。 从动物胰脏中提取胰蛋白酶，一般是用稀酸将胰腺细胞中含有的胰蛋白酶原提取出来，然后根据等电点沉淀的原理将提取液的pH值调至酸性(pH3.0左右)，使大量的酸 ...

相关专题 生命科学领域发生的革命性变化，对生命活动的研究正在从传统的还原式研究转向了整体性的研究——以基因组学(功能基因组学)和蛋白质组学为基础的系统生物学。其中蛋白质组学包括表达蛋白质组学(expression proteomics)、结构蛋白质组学(structural proteomics)和功能基因组学(functional pro ...

相关专题 随着生物技术的发展，蛋白质与基因之间的互作逐渐成为科研人员的关注热点，染色免疫沉淀技术由此而生，并被应用到各个科研领域当中。本文聚焦染色质免疫沉淀技术的原理、应用和抗体选择等问题，让您对其有更全面的了解和认识。 随着人类基因组测序工作的基本完成，功能基因组学的研究逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领 ...

相关专题 免疫沉淀(IP)是一种利用的抗原抗体反应的原则，确定具体反应中混合物的抗体蛋白数量及具体物理特性的方法。而免疫共沉淀(Co-IP) 则作为分析蛋白质间的相互作用而被广泛认知。下面是这两种实验方法的具体操作步骤。 Steps of IP: 1. Form the antigen-antibody complex (immune co ...

相关专题 颇尔公司(Pall Corporation)于1946年由颇尔博士(Dr. David B Pall)创建于美国纽约，是目前世界上最大的专注于过滤、分离、纯化技术及产品研制的跨国公司。现在，颇尔公司在层析技术上投入大量的研发力量，通过不断的技术创新，开创性地研制出了众多高性能的层析介质，同时在层析预装柱和层析系统方面也更注重客户的 ...

相关专题 western blot中膜的选择是实验成功的关键点，Western blot实验中一般可以选择硝酸纤维膜(NC) 和PVDF膜，那NC膜和PVDF膜有什么区别呢?怎样才能选择最恰当的杂交膜进行Western blot实验呢? NC膜 PVDF膜 尼龙膜的特点 解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型;硝酸纤维素膜(NC膜 ...

相关专题 蛋白组学研究是建立在蛋白定量的基础上的，蛋白质快速定量主要原理是依据蛋白自身的发色基团或者和显色试剂间反应物的紫外吸收值来进行定量的，蛋白定量最常用的方法主要有BCA法、考马斯亮蓝法、以及lowry法，目前蛋白定量也有利用荧光法进行蛋白定量实验。 蛋白质含量通常采用氨基酸分析法、凯氏定氮法、比色法、紫外分光光度法等进行测定。蛋白质 ...

相关专题 一、材料与仪器 30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液，pH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液，pH6.8;电泳缓冲液，pH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板，电泳电源架，电泳槽，电泳仪等;蛋白Mark。 二、方法与步骤 1)分离胶和 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 甲醇酵母表达系统有不少优点，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统最为人熟知，并广泛应用于外源蛋白的表达。虽然说酵母表达操作简单表达量高，但是在实际操作中，并不是每个外源基因都能顺利得到高表达的。不少人在操作中会遇到这样那样的问题，收集了部分用户在使用EasySelect Pichia Expr ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 在原核蛋白表达过程中选择构建一个合适原核表达体系需要综合考虑3大因素：表达载体、宿主菌株、表达诱导条件以获得最满意的表达效果.事实上在平时的实验中最容易被忽视的就是宿主菌的选择――多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株或者是载体配套的菌株而不去追究原因――即使表达结果不佳大多在表达条件和载体上找原因也不会考 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 New England Biolabs在实验室工作时间较长的人都不会陌生特别是海归派.成立于上个世纪七十年代中期NEB是当今全球限制性内切酶最重要的供应商超过 30%已知的限制性内切酶是首先在NEB发现的.NEB供应的限制型内切酶种类足有210多种也是最多的(目前仅有少数几个被其他公司专利的内切酶 NEB不提供比 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 研究者们在分离到某一基因后要对其编码蛋白质进行研究最理所当然的工作就是表达――即：有目的性地合成外源基因产物.在重组DNA技术的发展早期人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达.随后认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多除了要有强启动子和起始密码子外良好的表达尚需编码目 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 一、大肠杆菌表达载体 大肠杆菌表达载体都是质粒载体。作为表达载体首先必须满足克隆载体的基本要求，即能将外源基因运载到大肠杆菌细胞中。在基本骨架的基础上增加表达元件，就构成了表达载体。各种表达载体的不同之处在于其表达元件的差异。 1.表达融合蛋白的表达载体 当蛋白质表达以后，有效的分离纯化或分泌就成为获得目标蛋白的 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法.植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上受噬菌体T7强启动子控制;表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导.当需要表达蛋白时在细菌培养基中加入IPTG来启动表达.不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽“标签”的序列在定位、检测或纯化目的蛋 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 本世纪60至70年代对大肠杆菌的研究使之成为自然界中最普遍为人们所认识的生物体。大肠杆菌具有两个显著特征：操作简单和能在廉价的培养基中高密度培养，它的这些特征加上十多年外源基因表达的经验使其在大多数科研应用中成为高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。尽管大肠杆菌有众多的优点，但并非每一种基因都能在其中有效表达。这 ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 E.coli的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶此外还有一个操纵序列O、一个启动子序列P及一个调节基因I.I基因编码一种阻遏蛋白后者与O序列结合使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态.在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(CAP)结合位点.由P序列、O序列和C ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 GST融合蛋白的表达与纯化原理 GST 纯化系统是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和，通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化 。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白，并可反复使用数次。试剂u IPTG(异丙基硫代-β-D ...

相关专题 蛋白表达技术全攻略 GST表达融合蛋白载体pGEX-KG大小：5006bp，氨苄青霉素抗性(Ampr)，IPTG诱导表达酶切位点：BamHI 930、SmaI 937、EcoRI 962、XbaI 966、NcoI 974、SalI 980、XhoI 985、SacI 992、HindIII 994GST分子量：构建pGEX-KG-Y ...