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- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
48T/96T
- 供应商：
酶研生物
- 检测范围：
详询
- 检测方法：
双抗夹心法
- 应用：
定性、定量检测
- 适应物种：
大鼠
- 标记物：
无
- 样本：
血清、血浆、细胞上清、尿液等
- 规格：
48T
免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。
二，免疫组化技术的基本原理
免疫组化技术是一种综合定性、定位和定量；形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。在原位检测出病原的同时，还能观察到组织病变与该病原的关系，确认受染细胞类型，从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。
免疫酶组化技术是通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位，根据酶标记的部位可将其分为直接法（一步法）、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体，最好是特异性强的高效价的单克隆抗体。直接法是将酶直接标记在第一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。目前通常选用免疫酶组化间接染色法。
三，免疫组化步骤
1，切片，烤片60℃，1h；
2，脱蜡及复水
二甲苯10min，100％乙醇5min，95％乙醇5min，90％乙醇5min，85％乙醇5min，80％乙醇5min， 75％乙醇5min，60％乙醇5min，50％乙醇5min，30％乙醇5min，自来水1min；
3，1份30％H2O2加10份蒸馏水，室温10min，蒸馏水洗3次，每次3min；大鼠早期生长应答蛋白3(EGR3)ELISA试剂盒/大鼠早期生长应答蛋白3(EGR3)ELISA试剂盒4，微波修复
将切片浸入0.01M枸橼酸缓冲液，微波中最大火力（98℃-100℃）加热至沸腾，冷却（约5-10min），反复两次；
5，将切片自然冷却至室温，PBS洗涤3次，每次5min；
6，封闭，5％BSA，室温20min，甩去多余液体；
7，滴加一抗，37℃，1h，或者4℃过夜；
8，PBS洗涤3次，每次3min；
9，滴加二抗，37℃，15-30min；
10，PBS洗涤3次，每次3min；
11，滴加SABC，37℃， 30min；
12，PBS洗涤3次，每次5min；
13，1ml蒸馏水中分别滴加显色剂，混匀；
14，DAB显色剂配置好后，滴加于切片，室温，镜下检测反应时间（约5min）；
15，自来水冲洗干净，过蒸馏水；
16，苏木素复染2min，自来水冲洗；
17，脱水
30％乙醇3min，50％乙醇3min，70％乙醇3min，80％乙醇3min，90％乙醇3min，95％乙醇3min，100％乙醇3min，二甲苯20min；
18，树胶封片，镜检。
四，免疫组化常见问题分析
1，石蜡切片在染色过程中出现脱片现象
1）烤片时间不够，或温度不够，可以延长烤片时间和提高烤片温度；
2）用含有多聚赖氨酸的玻片，可以购买到或这自己做；
3）有些组织本身就容易掉片，如骨组织等，操作时冲PBS不要直接冲到组织上，冲到组织上方，让它流下冲洗组织；
4）用高温修复时，温度骤冷也可能引起。
2，边缘效应
1）组织边缘与玻片粘贴不牢，边缘组织松脱漂浮在液体中，每次清洗不易将组织下面试剂洗尽所致. 解决办法：制备优质的胶片（APES或多聚赖氨酸），切出尽量薄的组织切片，不厚于4微米，组织的前期处理应规范，尽量避免选用坏死较多的组织；
2）切片上滴加的试剂未充分覆盖组织，边缘的试剂容易首先变干，浓度较中心组织高而致染色深。解决办法：试剂要充分覆盖组织，应超出组织边缘2mm。用组化笔画圈时，为了避免油剂的影响，画圈应距组织边缘3-4mm。
3，产生组织切片非特异性染色
1）抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条；
2）一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看；
3）内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；
4）非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；
5）DAB孵育时间过长或浓度过高；
6）PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要；
7）标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。
4，免疫组化染色呈阴性结果大鼠早期生长应答蛋白3(EGR3)ELISA试剂盒/大鼠早期生长应答蛋白3(EGR3)ELISA试剂盒4，免疫组化染色呈阴性结果
1）抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误；
2）抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合；建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验，这是最佳的时间和次数。若不行，还可高压修复；
3）组织切片本身这种抗原含量低；
4）血清封闭时间过长；
5）DAB孵育时间过短；
6）细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应；
7）开始做免疫组化，我建议你一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等外的方法问题。
5，背景
1，考虑一抗浓度高；
2，然后调整DAB孵育时间；
3，也要考虑血清封闭时间是否过短；
4，适当增加抗体孵育后的浸洗次数和延长浸洗时间等。
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文献和实验。结合物溶液中加入等体积的甘油可在低温冰箱或普通冰箱的冰格中较长时间保存。早期的ELISA试剂盒中的结合物一般均按以上两种形式供应，配以稀释液（见3.2.5）临用时按标明的稀释度稀释成工作液。现在较先进的ELISA试剂盒均已用合适的缓冲液配成工作液，使用时不需再行稀释，在4-8℃保存期可达6个月。由于蛋白质浓度较低，结合物易失活，需加入蛋白保护剂。另外再加入抗生素（例如庆大霉素）和防腐剂（HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加叠氮钠），以防止细菌生长。3.2.5 结合物的稀释液用于稀释高浓度的结合
，标本留取按照该试剂盒说明书的要求操作。 【临床意义】IL-2原称T细胞生长因子，是最为重要的淋巴因子之一，在机体复杂免疫网络中起中心调节作用，它能诱导和激活机体多种免疫细胞发挥效应。因此，IL-2在机体免疫应答、免疫调节和抗肿瘤免疫中具有重要作用。IL-2产生或表达异常与临床多种疾病有密切关系，通过测定人外周血、尿液中IL-2水平，或激活淋巴细胞上清液中IL-2水平，可为疾病的早期诊断、预后及疗效观察提供可靠数据。 1.IL-2增强肿瘤、心血管病、肝病等疾病时均可使IL-2水平升高
=3&age=0 【请教】关于IL-4 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=5748878&sty=1&tpg=3&age=0 【请教】大鼠组织ELISA 具体如何处理组织 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=5732422&sty=1&tpg=3&age=0 【请教】对硝基苯磷酸有没有毒啊 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68
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