整合摇床的厌氧培养箱

叶盘法转基因烟草技术

相关专题   一．实验目的： 学习并了解叶盘法转基因烟草的技术流程。 二. 实验原理： 土壤中的农杆菌是一种革兰氏阴性菌，能够感染植物 的受伤部位。农杆菌中有一种环形的Ti质粒，Ti质粒最重要的两个区域为T-DNA区和毒性区，T-DNA是Ti质粒上唯一能够整合到植物染色体上的序列，而毒性区上一系列则帮助T-DNA区整合到植物的染色体上。 土壤农杆菌转化植物 的常用方法是叶盘法。这种转基因方法十分简单，一般是将植物的叶片

【专题讨论】Western-blot

机，避光盒，塑料袋 实验步骤 １、 配制TBST缓冲液 ↓ ２、 将转膜夹子从转膜装置中取出、打开，用平头镊子将NC膜或PVDF膜移入装有1%丽春红的平皿中，染色30s或更长时间，此时应该肯定膜上有整齐的粉红色蛋白条带，蛋白Marker泳道只有标定分子量的蛋白条带，用圆珠笔标记Marker泳道的蛋白条带，剪去多余的部分。 ↓ ３、 将标记好Marker、剪裁好的膜移入装有TBST缓冲液的平皿中，摇床设为80rmp，洗去然在膜上的丽春红，洗涤期间适时更换TBST缓冲

菌液PCR的经验

（只有上游T7无下游SP6）：T7+目的基因-R pEGFP（MCS两侧无通用序列）：自己设计靠近两侧的特异性引物（也可以求助 于测序公司，如：上海英骏/Invitrogen，他们有绝大多数载体的测序用的引物序列） 仔细的阅读你的载体图，选择针对阳性重组子的特异性引物组合 2. 菌落的处理 （我用的是质粒小提，用15ml离心管摇菌，通常加5ml培养基） 挑取新鲜菌落于含抗性的（LB）培养基中 37°C 200rpm摇床 摇2-4小时