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- EK-Bioscience
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- 2025年07月09日
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表达载体的构建是生物技术和所需蛋白质产生的基本工具，本文总结了pET-32α（+）载体技术的构建，该技术通常用于研究实验室。该方法包括获得用于构建载体的外源DNA片段，将DNA片段亚克隆到pET-32α（+）表达载体中，在大肠杆菌 BL21（DE3）中进行蛋白质表达以及在大肠杆菌中在天然条件下进行蛋白质纯化。裂解液。介绍作为分子生物学实验室中非常有用的实践，重组DNA技术（或基因克隆）是指将DNA片段从一种生物体转移到自我复制的遗传元件如表达载体。然后插入的DNA可以在外源宿主细胞中繁殖
相关专题 1)噬菌体DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)是最常用的表达菌株，噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株，构建好的表达载体 可以直接转入表达菌株中，诱导蛋白的表达方式与lac启动子一样都是IPTG诱导。 2)表达菌株BL21(DE3)上带有lacI基因，T7 RNA 聚合酶编码基因以及lacUV5启动子，lacUV5启动子可以启动T7 RNA 聚合酶的表达; 3)表达质粒 如pET-28质粒带有T7启动子和编码阻遏
a氨苄抗性带His标签（N端）+DsbA(二硫键形成蛋白A)：氨苄抗性带Gst标签（N端）：pGEX-KG，pGEX4T-1，pGEX-5x-1共表达载体：pET-duet。(含有两个T7启动子)表达宿主菌为M15系列表达载体：pQE31表达宿主菌为DH5a,JM109系列热启动表达载体：pBV220克隆载体pGEM-7Z,pUC19 三，自研发原核表达载体1，带His标签（N端）：PET-DsbA卡那抗性2，带His标签（N端）：PET-DsbA（mutation）卡那抗性说明：DsbA(二硫
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