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- CRISPR-Cas9精准基因编辑细胞株定制
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- 2026年05月03日
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- 提供商：
杭州舒桐生物科技有限公司
- 服务名称：
基因定点敲入/点突变细胞系
- 规格：
一套
精准基因编辑细胞株定制
随着ZFN、TALEN和CRISPR-Cas9技术的兴起，基因组编辑领域获得长远的发展。借助靶向基因组编辑工具，我们可以在基因组水平上精确编辑，设计产生全新的细胞株模型。定制精准编辑细胞株模型(genome edited cell line models)是体内研究基因功能的理想工具，已成为现代生物学在基因功能研究、肿瘤治疗和生物制药等领域重要的研究材料。基因组编辑技术（genome editing）是一种可以在基因组水平上对DNA序列进行改造的遗传操作技术。这种技术的原理是构建一个人工内切酶，在预定的基因组位置切断DNA，切断的DNA在被细胞内的DNA修复系统修复过程中会产生突变，从而达到定点改造基因组的目的。DNA修复系统主要通过两种途径修复DNA双链断裂（double-strand break,DSB）,即非同源末端连接（Nonhomologous end joining, NHEJ）和同源重组（homologous recombination, HR）。杭州舒桐生物科技有限公司不断探索基因组编辑在多种细胞系中的应用，已成功在数十种细胞系中实现了高效基因组编辑。基于慢病毒包装技术、转座子技术及 CRISPR/Cas9 靶向基因编辑技术，推出了精准编辑细胞株定制服务，包括基因敲除、定点基因敲入、点突变和定点基因大片段删除。基因定点敲入/点突变细胞系
CRISPR-Cas9系统编辑切割产生DNA双链断裂（Double-Strand Breaks， DSBs），可诱发 DNA 的自然修复机制。如果在此基础上同时为细胞引入一个同源性的外源DNA作为修复模板（Donor），该Donor序列上带有目标突变，那么，细胞可据此通过同源重组（Homology-directed Repair， HDR）修复机制获得目标突变，产生目的点突变细胞。若修复模板序列带有目的基因序列，则可通过同源重组机制实现基因定点插入，最长可定点敲入10kb的目的基因。
基因定点敲入/点突变细胞系构建流程
细胞预实验→gRNA及靶点设计→载体构建→gRNA靶点活性检测→设计并构建Donor载体→构建细胞系→基因型鉴定及RT-PCR检测
基因定点敲入/点突变细胞系交付材料
(1)靶基因敲除单克隆细胞系冻存细胞2支；
(2)实验测序数据；
(3)详细的实验结题报告（包括实验步骤，引物信息，实验结果等）
舒桐基因定点敲入/点突变技术优势：
(1)自主研发优化的CRISPR系统和donor设计，有效提高编辑成功率；
(2)最长可定点敲入10kb的目的片段；
(3)针对不同细胞系制定专属方案，有效提高编辑成功率；
(4)服务团队经验丰富，确保服务质量。
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文献和实验TALEN和CRISPR/Cas9作为现代分子生物学技术上的一次革新，它结合了转基因技术简便快速，没有物种限制及ES细胞基因打靶技术精准的优点，在短短的几年时间里便受到广大科研人员的青睐。但由于其脱靶效应至今无法避免，且难以胜任大片段的基因敲入，所以还远远谈不上成熟。如何提高TALEN和CRISPR/Cas9的效率和降低脱靶效应将是未来的主要研究方向。基于同源重组的ES打靶是基因敲除的业内金标准，它通过同源重组技术将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造基因组某一基因的目的
性酶切。 除了制备插入片段，PCR 也是一种在在克隆后筛选克隆是否携带目标插入片段的有效方法。引物经过设计，可以用于确定载体中插入片段是否存在和插入方向。 4.突变 PCR 克隆的一大优点是能够通过克隆将所需突变引入目的基因中，以便进行突变研究。在定点突变中，经过设计的 PCR 引物可将碱基置换、删除或插入整合到特定序列中。如图 5所示，引物定位到已克隆至质粒中的序列上。随后，含有引入突变的 PCR 产物通过自我连接，重新生成环状质粒，并用于转化感受态细胞。 图 5.PCR 用于定点突变。该方法使用非重叠
基因编辑再次升级！领域大牛刘如谦 Cell 发文开发新工具，可安全高效进行体内基因编辑
了先导编辑（Prime Editor, PE）。刘如谦带领团队开发的这一系列基因编辑工具能够在不造成 DNA 双链断裂的情况下，实现对基因组的点突变进行定点矫正修复，因此被认为是比较安全的，也更具有临床应用前景。前期的研究工作也已经证实可以应用 BEs 来纠正小鼠和非人灵长类动物的致病点突变并改正疾病表型，强调体内碱基编辑作为一种治疗策略的潜力。 要想将碱基编辑技术广泛应用于临床治疗，那么就需要安全有效的方法将单碱基编辑器输送到多个组织和器官。截至目前，最常用和最有效的载体仍然涉及病毒的使用
