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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 库存：
85
- 样本：
血清、血浆、组织液等液体样本
- 标记物：
hrp辣根过氧化物酶
- 适应物种：
人、小鼠、大鼠、山羊....
- 应用：
科研
- 检测方法：
ELISA法
- 检测范围：
详询
- 规格：
96T
沙拉沙星（SAR）含量ELISA检测试剂盒（农药残留）
96T
请客户正式实验前做预实验确定样本稀释倍数！
实验原理：本试剂盒应用间接竞争法测定标本中沙拉沙星（SAR）水平。用纯化的沙拉沙星（SAR）标准品包被微孔板，制成固相抗原。样品中沙拉沙星与固相抗原竞争抗体，再利用HRP标记的二抗催化底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的沙拉沙星（SAR）呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中沙拉沙星（SAR）浓度。
实验目的：测定组织、血清、血浆及相关液体样本中沙拉沙星（SAR）含量。
本试剂盒检测范围：0.16-2.56 ug/mL
样本处理及要求：
- 血清：血液室温自然凝固90分钟，离心10分钟（3000转/分），收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。将上清液用氮气吹干，20 μL 0.03M NaOH复溶。实验时，用dilution buffer稀释复溶后的样品。
- 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心10分钟（3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。将上清液用氮气吹干，20 μL 0.03M NaOH复溶。实验时，用dilution buffer稀释复溶后的样品。
- 尿液：用无菌管收集，离心10分钟（3000转/分），收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。将上清液用氮气吹干，20 μL 0.03M NaOH复溶，实验时，用dilution buffer稀释复溶后的样品。
- 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心10分钟（3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。将上清液用氮气吹干，20 μL 0.03M NaOH复溶。实验时，用dilution buffer稀释复溶后的样品。
- 组织标本：称取组织1g，加入1mL PH7.4的PBS，充分研磨。3000转/分，离心10分钟，收集上清。将上清液用氮气吹干，20 μL 0.03M NaOH复溶。实验时，用dilution buffer稀释复溶后的样品。
操作步骤：
1. 标准品的稀释与加样：用0.03M NaOH配制5mg/mL的标准品母液，根据实验使用量用试剂盒中dilution buffer将母液稀释1000倍成5 μg/mL（先稀释100倍，再稀释10倍），并将其稀释到 2.56 ug/mL。设置浓度分别为2.56 ug/mL，1.28 ug/mL，0.64 ug/mL，0.32 ug/mL， 0.16 ug/mL的标准曲线。标准曲线每个浓度设置两个重复，浓度稀释采用倍比稀释法，分别取五支EP管，加入200 μL dilution buffer，取200 μL 2.56 ug/mL的标准品至第一管混匀成1.28 ug/mL标准液，再从其中取出200 μL 至第二管混匀成0.64 ug/mL标准液，以此类推，得到6个浓度梯度的标准液。
2. 样品与抗体预结合：用0.1%OVA将抗体稀释20000倍，分别设标准孔、待测样品孔、空白孔、对照孔。
标准孔：分别取130 μL上述6个浓度梯度的标准液与等体积稀释后的抗体混合。
待测样品孔：130 μL样品与等体积稀释后的抗体混合。
空白孔：取260 μL dilution buffer。
对照孔：取130 μL dilution buffer与等体积稀释后的抗体混合。
将上述各管室温摇床温育40分钟。
3. 温育：将上述各管混匀后每孔加入100 μL，用封板膜封板后置37 ℃温育90 min。
4. 洗涤：将50倍浓缩洗涤液washing buffer用蒸馏水50倍稀释后备用，弃酶标板中液体，吸水纸上拍干，每孔加入300 μL洗涤液，停留1 min，弃液体，拍干。重复4次。
5. 加酶标二抗：400倍稀释二抗，每孔加入100 μL，用封板膜封板后37 ℃温育60 min。
6. 洗涤：将50倍浓缩洗涤液washing buffer用蒸馏水50倍稀释后备用，弃酶标板中液体，吸水纸上拍干，每孔加入300 μL洗涤液，停留1 min，弃液体，拍干。重复4次。
7. 显色：每孔加入TMB显色液 100 μL，混匀，37 ℃避光显色15-20 min。
8. 终止：每孔加终止液50 μL，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡20分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔，实验方法中包含了两次重复，若增加重复次数，请相应调整。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． TMB显色液请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
计算：
抑制率=（A对照- A测定）/ A对照*100%
以标准物的浓度为横坐标，抑制率为纵坐标，绘制对数标准曲线，根据标准曲线计算相应的样本浓度；再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
试剂盒保存：2-8℃，没用完的酶标板-20℃保存。
有效期：6个月
本试剂盒仅供研究使用
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