- ￥340
- Xkbio
- XK-SJH-A527
- 国产
- 2025年07月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Acid Xylanase Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/24样
酸性木聚糖酶（Acidic Xylanase，ACX）测定试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，ACX 一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。
测定原理
ACX 在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，可计算 ACX 活力。自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。试剂组成和配制
缓冲液：液体 90mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 12mL×1 瓶，4℃避光保存。（若出现白色絮状或颗粒状沉淀，可 60℃加热溶解后使用）。
试剂二：液体 18mL×1 瓶，4℃避光保存。
粗酶提取
- 发酵液：发酵液于 8000g，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样品。
- 酶干粉：称约 0.1mg，加 1mL 缓冲液溶解待测。
- 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g
测定操作表
| 对照管 | 测定管 | |
| 样品（μL） | 200 | 200 |
| 缓冲液（μL） | 300 | 300 |
| 试剂一（μL） | 200 | |
| 混匀，50℃水浴中反应 30min，立即沸水浴中 10min 灭活。(注意不要让盖子爆开，以免进 水，改变了反应体系) |
||
| 试剂一（μL） | 200 | |
| 试剂二（μL） | 300 | 300 |
| 混匀，沸水浴中显色 5min(注意不要让盖子爆开，以免进水改变了反应体系)，1mL 玻璃比 色皿，540nm 处测定吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。   |
||
标准曲线：y = 2.5554x - 0.002 ，R2 = 0.9983
- 按液体体积活力计算：
ACX 活力（nmol/min/mL）= （ΔA+0.002）÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×106
= 435× (ΔA+0.002)
- 按蛋白浓度计算：
ACX 活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.002）÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr
= 435×(ΔA +0.002 ) ÷Cpr
- 按鲜重计算：
ACX 活力（nmol/min/g 鲜重）= （ΔA +0.002）÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×106÷W
= 435×(ΔA +0.002 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V 反总÷V 样=1000µL÷200µL=5；
106：转化因子，即 1mg/mL=106ng/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
注意事项
- 吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
- 试剂盒 2-8℃保存，保质期 3 个月，建议尽快使用。
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文献和实验，Bradford，双缩脲法（Biuret 法），Folin 法（Lowry 法）和紫外分光光度计法。BCA 法的原理是在碱性条件下，氨基酸将二价铜还原为一价铜与 BCA 形成紫颜色的络合物，测定 562 nm 的 OD 值，所以如果样本里有还原剂（比如 DTT）的话就会对 BCA 的结果产生干扰。Bradford 法（考马斯亮蓝法）是在酸性条件下，加入考马斯亮蓝 G250 与蛋白质（主要是碱性或芳香族氨基酸）结合为蓝色化合物，吸光度值从 465nm 变成 595 nm，最后测定 595 nm 的 OD 值
【原理】硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐： 产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α–萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。其反应如下：生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以Nμg·g﹣1·h﹣1为单位。NR的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单，适合快速、多组测定。离体法复杂，但重复性较好。【仪器与用具】分光光度计；真空抽气
的系列溶液。 （3）别取上述各溶液２ml，加入已编号的7个试管中，再分别加入２ml冰醋酸，4ml酸性茚三酮试剂，2ml磺基水杨酸溶液； （4）摇匀后，用玻璃盖上试管口，在沸水浴中反应2h； （5）将试管取出，冷却至室温，然后向各试管中加入４ml甲苯，手工充分震荡后，静置约10min，红色反应产物被萃取到甲苯层； （6）用滴管吸取红色的甲苯萃取液于比色皿中，在分光光度计520nm波长处测定吸光度； （7）以脯氨酸含量
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