Omn-09 高纯质粒 大 提试剂盒

Omn-09 高纯质粒 大 提试剂盒

产品 简介 
本产品是一款从工程菌内大量提取质粒 DNA 的试剂盒，并能够去除蛋白质与 RNA，得到高纯
度的质粒 DNA，用于转染和酶切等生物学实验。

特点与优势
1. 有效去除蛋白质与 RNA，得到高纯度的质粒 DNA。
2. DNA 纯化柱可结合 5 mg 质粒 DNA。

使用说明
1. 试剂配制：
a) Buffer P1 (重悬液) 配制。将 RNase A 全部加入 Buffer P1 中，混匀，4 ℃保存。
b) Buffer W3（漂洗液）配制。溶液中加入 70 mL 无水乙醇，混匀。
2. 细菌收集。将菌液加入 50 mL 离心管，12,000×g 离心 2 min，弃上清。剩余菌液加入对应的离心
管中，再次离心并弃上清，直至所有菌液收集完毕，将离心管倒立在纸巾上，吸尽残余液体。
3. 加入 7.5 mL Buffer P1（确定加入 RNase A），振荡（vortex）至细菌完全重悬。
（ 若细菌沉淀 没有 完全 重悬， 会影响裂解 效果 ， 降低 质粒 DNA  提取量 。 ）
4. 加入 7.5 mL Buffer P2（ 室 温 较低时 ，Buffer P2 在 易沉淀，请在 37 ℃ 水浴锅中 加热 10 min ，待沉
淀 消失 后再使用），轻柔地上下翻转 20 次，液体变透明，保证细菌充分裂解。
（ 不要剧烈震荡（vortex ），以免 DNA  断裂。裂解时间不宜超过 5 min ，以免质粒 DNA  受到破
坏。 细菌 充分裂解后液体变得清亮粘稠。如果仍然浑浊， 则细菌 过量 ，裂解不彻底，应加大裂
解液用量。 ）
5. 加入 10.5 mL Buffer P3，立即温和地上下翻转 20 次，充分混匀，出现白色絮状沉淀。
（ 混匀要充分 ， 以免出现局部沉淀，影响中和效果。）
6. 12,000×g 离心 10-20 分钟，上清转入新的 50 mL 离心管中。 （ 尽量 避免吸取 白色沉淀 ）
7. 上清加入 DNA 纯化柱，12,000×g 离心 1 min，弃滤液。剩余的上清液依次加入相应的 DNA 纯
化柱，12,000×g 离心 1 min，弃滤液，完成 DNA 吸附。
8. 加入 5 mL Buffer W1（去蛋白液），12,000×g 离心 2 min，弃滤液。
9. 加入 5 mL Buffer W3（漂洗液），12,000×g 离心 2 min，弃滤液。
10. 空的 DNA 纯化柱，12,000×g 离心 3 min，尽量去除 DNA 纯化柱中残余液体。
11. 将 DNA 纯化柱转移至新的 50 mL 离心管（质量好的离心管，确保不会因为离心过大而破碎，从
而导致质粒提取失败），在柱中央滴加 2 mL Elusion Buffer D 或 ddH 2 O，室温静置 5 min。
12. 12,000×g 离心 2 min，收集质粒 DNA 溶液。
13. 在纯化柱中央再次滴加 2 mL Elusion Buffer D 或 ddH 2 O，室温静置 5 min， 12,000×g 离心 2 min，
收集质粒 DNA 溶液。 （ 本试剂盒中的 DNA  纯化柱 为高结合力的 核酸 纯化柱 ， 需要 洗脱两次 以
上才能将吸附的质粒完全洗脱下来 ）
14. 测定质粒 DNA 浓度，或置于-20 ℃冰箱中保存。