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U251MG细胞系 、U-25
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U-251 MG
///
1x10^6/cell
上海酶研
人神经胶质细胞瘤细胞 U-251 MG
人
贴壁/悬浮
是
顺丰快递
5年
生长良好
U251MG细胞系 、U-251MG细胞株、U251MG 神经胶质细胞瘤细胞 U-251 MG细胞贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后,继续生长的空间不足,培养基中的营养成份也消耗较多,同时代谢废物也有较多堆积,需要分瓶培养,对细胞进行传代扩增。对于贴壁不太紧的细胞如293,可以直接吹散后分瓶。而对于贴壁较紧的细胞如CHO,则需要以胰酶消化后再吹散分瓶,一般过程为 (以下操作均按无菌操作的要求进行):将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去;加入0.25%胰酶溶液,视细胞瓶的大小加入体积为0.5ml或更多,以使充分浸润;一般消化时间约为1至3分钟,肉眼观察瓶壁半透明的细胞层,当见到出现细针孔空隙时,弃去胰酶溶液,并加入适量的细胞培养液终止消化;视实验要求分入多瓶继续培养,一般为一传二到一传四的比例。这里,胰酶消化的程度是一个关键:消化过度则对细胞的活性损伤较大,并有部分细胞漂浮,随弃去的胰酶流失;消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下,反复吹打同样也会损伤细胞活性。影响消化速度的因素较多,主要有胰酶溶液的活性(配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等)、消化时的温度(气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度)以及所加胰酶溶液的多少等。以笔者的经验,以轻吹或加培养液后轻摇可下较好,但对于经验不太充分的实验者而言是较难判断掌握的。 下面将细胞生长及不同消化程度的光学显微镜照片列出以供参考。所用细胞为CHO贴壁细胞,培养基为含10%小牛血清的DMEM-F12,倒置显微镜10X40,数码相机300万像素。取细胞冻存管一支,于40°C水中速融;25ml细胞方瓶中加入含10%COSMIC小牛血清的DMEM-F12培养基10ml,将冻存管中细胞全部洗入瓶中,置37°C 2.5%二氧化碳孵箱中静置培养。4小时后倒去全部培养基以去除冻存液,更换10ml培养基,同上静置培养。经24小时培养后,生长情况为:经48小时培养后,细胞已长成致密单层:致密单层细胞在细胞瓶上呈雾状,使瓶壁呈半透明:弃去培养液,在此可先摇动细胞瓶,使老化死亡贴壁情况不好的细胞随培养液弃去。 加入0.25%胰酶后,细胞逐渐皱缩变圆,细胞间隙增大不再致密:刚加入胰酶,细胞仍呈致密单层:细胞开始皱缩但不明显,仍维持细胞正常形态:细胞明显皱缩变小,细胞间隙增大不再致密,部分细胞维持正常形态,部分细胞皱缩变圆:细胞基本皱缩变圆,此时细胞吹打可下:细胞完全皱缩变圆,此时应弃去胰酶,加入培养基后轻摇可将细胞从细胞瓶壁上洗下,将细胞悬液用吸管吹散后传代。有经验后,可肉眼对光观察帖壁半透明的细胞层,判断消化程度。如消化过头,会见到许多细胞脱落随弃去的胰酶溶液流失。也可以在倒数第二、三步时弃去胰酶,用瓶中残留的胰酶继续作用至最后一步的消化程度,这样略有点过也影响不大
上海酶研生物科技有限公司成立于2014年从事实验室生物科技、医药科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务。专业致力于ELISA试剂盒研发,创建ELISA试剂盒自主品牌Ek-Bioscience,以及各种抗体的研发生产,现有人、大鼠、小鼠、兔、猴、鸡、豚鼠等种属ELISA试剂盒1000余种。先后引进1000多株美国ATCC种细胞,建立国内细胞库,细胞来源清晰,人源细胞均通过STR验证,保证细胞的准确性。目前在上海、北京、武汉设有办事处,为广大科研单位提供便捷服务。代理Gibco、Gemini、ABCAM、EBioscience、SANTA、CST等品牌试剂,可承接各平台实验,课题外包,SCI润色等服务。
产品主要应用于分子生物学、酶联免疫学、细胞生物学、肿瘤、神经生物学、干细胞、病毒等。
我司本着“科技领先,精益求精”的经营理念致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供的科研试剂和完善的技术服务,满足生物化学、分子生物学 、细胞生物学、免疫学等生物科技实验需求。
经过多年的努力现与:清华大学、复旦大学、上海交通大学、华东师范大学、武汉大学等高校医院建立了良好的长期合作关系。
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375 人阅读发布时间:2015-04-01 15:18
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