产品货号:T0211 存储条件:-20℃保存 产品说明 Taq PCR Mix (含染料) 的浓度为 2×,使用方便快捷,能减少 PCR 操作过程中的污染,使用时只需取适量 2×Taq PCR Mix (含染料),加入模板和引物,并加入 ddH2O 补足体积,使反应体系浓度为 1×,即可进行 PCR 反应。该 Mix 中的 Taq 为筛选获得的突变体 Taq-AS(Advanced Strong) DNA Polymerase,能够高效扩增 ≤5Kb 的 DNA 片段,具有良好抑制剂耐受能力,其扩增速度约为普通 Taq DNA 聚合酶的 3 倍,因此可大幅度减少 PCR 延伸过程所需要的时间,达到缩短整个 PCR反应的目的。不同于融合蛋白原理的快速 Taq 聚合酶,Taq-AS 的使用更加接近 WT-Taq,不易出现电泳条带弥散、拖带或者片段大小改变等状况。本 PCR Mix 中包含两种染料,PCR 产物无需添加 Loading Buffer 可直接点样电泳,且电泳过程中会出现紫色和黄色两个指示条带。该染料不影响 PCR 扩增效率,但对于需要对 PCR 产物进行吸光度、荧光等光学分析的实验,建议在分析前对 PCR 产物进行纯化。PCR产物 3' 端带 A 碱基,纯化后可直接用于 T/A 克隆。 质量控制 核酸内切酶残留检测 将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37℃ 温育 4h,通过 DNA 电泳检测质粒无变化。 核酸外切酶残留检测 将酶液与双链 DNA 底物在 37℃ 温育 16 h,通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。 稳定性测试 室温存放一周,无明显活性改变。 功能检测 以拟南芥基因组 DNA 和人基因组 DNA 为模板,扩增 5kb 片段,30 个循环后经琼脂糖凝胶电泳检测可见 目的条带。
使用方法 1. 常规PCR反应体系 (冰上操作)
试剂
使用量
终浓度
2×Taq PCR Mix (含染料) a
25μl
1×
正向引物(10 μM)b
1~2μl
0.2~0.4μM
反向引物(10 μM)b
1~2μl
0.2~0.4μM
模板DNAc
Xμl
ddH2O
To 50μl
a. 需溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀; b. 引物推荐终浓度为 0.2~0.4μM,效果不佳时可以在 0.1~1μM 浓度范围内进行调整; c. 不同模板最佳反应浓度有所不同,以 50μl 体系为例:模板为基因组 DNA 时,一般推荐的使用量为 10~400ng;当模板为质粒或病毒 DNA 时,一般推荐的使用量为 10pg~20ng。 2. 三步法 PCR 反应程序 3. 二步法 PCR 反应程序 d. 菌落 PCR 时预变性 ≥5min,更有利于破壁。