胰蛋白冻干粉产品常遇到的活性定义及其转换, 1 BAEE U:在 25℃,pH 7.6 的条件下,以 BAEE 为底物,3.2 mL 的反应体系中,A253 吸光值每分钟会发生 0.001 的变 化即为一个胰蛋白酶酶活单位。 1 TAME U:在 25℃,pH 8.2,0.001M 的 Ca 2+的条件下,每分钟水解 1 微摩尔 TAME 的样品量。 1 USP U:在指定条件下,每分钟引起吸光值发生 0.003 的变化的样品活性。 1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit
使用方法(用于贴壁细胞的消化) 1. 胰酶浓缩液(2.5%)的配置 称取 2.5 g 胰酶粉末溶于 100 mL HBSS(无钙,镁)缓冲液,并调整 pH 在 7.4-7.6 范围。此时得到的即 2.5%胰酶浓缩液, 置于 4℃短时间保存,3 个月相对稳定。建议分装冻存,利于长期保存。解冻后可能会出现少量沉淀,属于正常现象,不会 影响其使用效力。 【注】冻干粉也可溶于其他不含钙镁离子的平衡盐缓冲液如 PBS。 细胞的消化可以直接用胰酶溶液,但通常使用的是胰酶-EDTA 溶液,因为 EDTA 是一种 II 价金属离子螯合剂,能够螯 合钙镁离子,减少细胞间的粘附性,从而增强胰酶的活性。
胰酶-EDTA 溶液的配制:
无 Ca 2+、Mg 2+及酚红的平衡盐溶液 485 mL 胰蛋白酶 10 mL (typically a 2.5% w/v solution) EDTA 5 mL of a 2% w/v solution
贴壁细胞的消化
方法一
移除培养板中的培养液,用不含 Ca 2+、Mg 2+的缓冲液清洗单层贴壁细胞,直至清除残余血清,吸除盐溶液。