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文献和实验人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南
。 5. 每孔加入2ml 1X PBS (BSS-1006-B)稀释AccuMax™溶液(A7089)。将细胞悬浮液置于50ml锥形管中。用1ml 1X PBS冲洗每孔,收集任何剩余的细胞,并加入到50ml锥形管中。移液器上下吹打几次以实现单细胞悬浮状态。 6. 室温下,细胞悬液130 x g离心5分钟。 7. 吸出上清液。 在 2 mL 的 AFE 诱导培养基 I (SCM305) 中重新悬浮细胞沉淀。 使用自动细胞计数器或血细胞计数器对细胞进行计数。 在 PBS 中配制4μg/mL的纤连蛋白 (F
前要进行一系列试验(超速试验、满速爆炸试验和寿命试验等),确保使用安全。 (一)角(度)转子 各种离心机的基本转子和最高速转子。角转子中离心管中心与旋转轴夹角一般为15——40°,呈圆锥形。常采用铝或钛合金制造。优点:强度高、重心低、运转平稳、离心时间短、寿命长和使用方便等。缺点:具有壁效应(离心管外壁部分形成的强烈的对流和旋涡)影响分离纯度。此转子常用于速度沉淀制备离心和样品浓缩。角转子的规格较多,常用32×15ml;6×50ml。 (二)甩平(水平)转子 离心管放于装在转轴上的吊篮中。静止
基),待菌液全部被吸收后,倒置平板于37℃培养12-16h。 1.2鉴定和挑选含重组质粒的菌落 1.用无菌牙签挑取单菌落,接种到10ml含氨苄青霉素的LB培养液的离心管中,于37℃,200转/分培养2h,取1ml之一Eppendorf离心管,加50μl10mmol/LEDTA(pH8.0)。 2.加入50μl新配置的0.2mol/LNaOH、0.5%SDS、20%蔗糖溶液后,振荡30秒。 3.在70℃温育5min,然后冷却到室温
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