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- WB蛋白质印迹（Western Blot），其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
- 北京
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
北京兰博泰斯生物科技有限公司
- 服务名称：
Western Blot检测服务
一、样本制备
1. 悬浮细胞：取大约 1×107个细胞，低速离心收集，弃去培养液，加入1ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70℃ 冰箱保存。
2. 贴壁细胞：取大约1×107个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70℃ 冰箱保存。
3. 组织：采集新鲜组织（注意：生物体死亡后10分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块，放入-70℃冰箱中保存。
样本量：组织样本，质量大于100mg；细胞样本，细胞数大于1×106；
二、蛋白质抽提
实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。 实验对象为细胞样品（细胞培养），每份样品取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。
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文献和实验llh刘丽华 请教高手我最近做western blot，结果总是不理想，目的条带总是很淡，上样量已经是60ug了，封闭用的是5%脱脂奶粉，我还应该怎么改进哦？下面是我的结果，采用的是ECL化学发光，凝胶成像系统拍照，下面一条是我的目的条带。 麻烦各位帮帮忙吧！ Mostino 转膜应充分，并提高第一抗体的使用量！ 成其瑞 用好点的抗体 volano
anlise 刚做的western，跑分离胶时发现mark的条带被拖长了，原来的线性条带变成了长方形。 考虑哪些方面的原因呢？ selleckchemcials 1. 可能是电流太强了， 可以考虑把电压调低一点~ 2. 分离胶浓度有点低，可以考虑把换成高浓度的胶~ 做实验的时候，为了得到漂亮的图，一定不要介意多花时间~我有的时候为了让条带好看，170KD的蛋白都用12%的胶，跑上3小时呢~
zhuhuachao 请问各位战友， western-blot法测得的结果是你所要检测蛋白的总蛋白还是只包括游离的蛋白？或者说该目标蛋白与其他蛋白结合以后，western-blot法结果上是否有所反应？ amygdala 一般来说，western blot检测到的是包括游离态和聚合态的总蛋白，目标蛋白与其他蛋白结合的情况下也能检测出来。能否检测取决于抗体的识别位点是否存在，通常情况下目标蛋白的抗体识别位点不会受其形成复合物影响
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