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活性氧 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 深红色荧光
1年
恒斐生物
在零下15度以下保存, 避免光照
200 Tests
货号 | 22903 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 | |
规格 | 200 Tests | 价格 | 2544 | |
Ex (nm) | 658 | Em (nm) | 675 | |
分子量 | 溶剂 |
适用仪器
流式细胞仪 | |
激发: | 640nm激光 |
发射: | 660/20nm滤波片 |
通道: | APC通道 |
荧光显微镜 | |
激发: | Cy5滤波片 |
发射: | Cy5滤波片 |
推荐孔板: | 黑色透明 |
荧光酶标仪 | |
激发: | 650nm |
发射: | 675nm |
cutoff: | 665nm |
推荐孔板: | 黑色透明 |
读取模式: | 底读模式 |
样品实验方案
简要概述
适用于荧光酶标仪、荧光显微镜
1.在生长培养基中制备细胞
2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
3.添加ROS Brite 670工作溶液(100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板)
4.将细胞在37℃下染色30-60分钟
5.在Ex / Em = 650/675 nm(截止= 665 nm)或使用TRITC滤光片组的荧光显微镜下检测荧光(底部读取模式)
适用于流式细胞仪
1.在生长培养基中制备细胞
2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
3.将ROS Brite 670与细胞一起孵育30-60分钟
4.使用具有FL4通道的流式细胞仪监测荧光强度
溶液配制
1.储备溶液配制
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. ROS Brite 670原液(500X):
将40μLDMSO(组分C)加入到ROS Brite 670(组分A)的小瓶中并充分混合以制备500X ROS Brite 670储备溶液。 避光。 注意:20μL的500X ROS Brite 670原液足以容纳1个平板。对于流式细胞仪,为方便起见,可将5倍ROS Brite 670储备液稀释5倍至DMSO中。为了存放,请将管子紧紧密封。
2.工作溶液配制
将20μL500XROS Brite 670储备溶液加入10 mL分析缓冲液(组分B)中,充分混合,制成ROS Brite 670工作溶液。 注意:此ROS Brite 670工作溶液在室温下稳定至少2小时。有关细胞样品制备的指南,请点击查看。
操作步骤
(适用于荧光酶标仪、荧光显微镜)
1.用10μL10X测试化合物(96孔板)或5μL5X测试化合物(384孔板)在所需缓冲液(如PBS或HHBS)中处理细胞。对于对照孔(未处理的细胞),加入相应量的化合物缓冲液。
2.为了诱导ROS,将细胞板在室温下或在5%CO2,37℃培养箱中孵育一段时间(例如:用100μM叔丁基guo氧化氢(TBHP)处理Hela细胞30分钟)。
3.向细胞板中加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的ROS Brite 670工作溶液。
4.将细胞在5%CO2,37℃培养箱中孵育30分钟至60分钟。
5.使用荧光酶标仪(底部读取模式)在Ex / Em = 650 / 675nm(截止值= 665nm)检测荧光增加,或使用具有TRITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞。
(适用于流式细胞仪)
1.以5×105至1×106个细胞/ mL的密度制备细胞。 注意:应根据个体评估每个细胞系,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。
2.用所需缓冲液(如PBS或HHBS)处理细胞。 对于对照孔(未处理的细胞),加入相应量的化合物缓冲液。
3.为诱导ROS,将细胞板在室温或5%CO2,37°C培养箱中孵育至少30分钟(用100μM叔ding基过氧化氢(TBHP)处理的Hela细胞30分钟)。
4.将1μL/ mL细胞的500X ROS Brite 670储备溶液或5μL/ mL细胞的100X ROS Brite 670储备溶液加入细胞培养基中。
5.将细胞在5%CO2,37℃培养箱中孵育30至60分钟。
6.使用具有FL4通道的流式细胞仪检测荧光强度。
数据分析
图1.使用Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒检测HeLa细胞中的ROS。 将HeLa细胞以15,000个细胞/90μL/孔接种在Costar黑色孔板中过夜。 未处理细胞(对照)或用1mM H2O2或100μM叔ding基过氧化氢(TBHP)在37℃处理30分钟。 加入ROS Brite 670工作溶液(100μL/孔)并在5%CO2,37℃培养箱中温育1小时。 使用FlexStation(Molecular Devices)在底部读取模式下在Ex / Em = 650 / 675nm(截止值= 665nm)下检测荧光信号。 |
参考文献
Anti-proliferation effect of blue light-emitting diodes against antibiotic-resistant Helicobacter pylori
Authors: Jianwei Ma, Takahiro Hiratsuka, Tsuyoshi Etoh, Junko Akada, Hajime Fujishima, Norio Shiraishi, Yoshio Yamaoka, Masafumi Inomata
Journal: Journal of Gastroenterology and Hepatology (2017)
Notoginsenoside R1 attenuates high glucose-induced endothelial damage in rat retinal capillary endothelial cells by modulating the intracellular redox state
Authors: Chunlan Fan, Yuan Qiao, Minke Tang
Journal: Drug Design, Development and Therapy (2017): 3343
Good hydration and cell-biological performances of superparamagnetic calcium phosphate cement with concentration-dependent osteogenesis and angiogenesis induced by ferric iron
Authors: J Zhang, HS Shi, JQ Liu, T Yu, ZH Shen, JD Ye
Journal: Journal of Materials Chemistry B (2015): 8782--8795
Topiramate Protects Pericytes from Glucotoxicity: Role for Mitochondrial CA VA in Cerebromicrovascular Disease in Diabetes
Authors: Ping Patrick, Tulin O Price, Ana L Diogo, Nader Sheibani, William A Banks, Gul N Shah
Journal: Journal of endocrinology and diabetes (2015)
Down-regulated peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) in lung epithelial cells promotes a PPARγ agonist-reversible proinflammatory phenotype in chronic obstructive pulmonary disease (COPD)
Authors: Sowmya P Lakshmi, Aravind T Reddy, Yingze Zhang, Frank C Sciurba, Rama K Mallampalli, Steven R Duncan, Raju C Reddy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2014): 6383--6393
Superoxide dismutase as a target of clioquinol-induced neurotoxicity
Authors: Kazuyuki Kawamura, Yukiko Kuroda, Masako Sogo, Miki Fujimoto, Toshio Inui, Takao Mitsui
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2014): 181--185
总活性氧(ROS)检测
活性氧(ROS)是氧正常代谢的天然副产品,在细胞信号中起着重要作用。总ROS检测试剂/试剂盒可以检测活细胞中的ROS。它与ROS反应时,会产生荧光。细胞内总ROS检测试剂/试剂盒有多种规格、颜色,可适用于多种仪器。
产品名称 | 货号 | 规格 | Ex/Em(nm) | 适用仪器 |
Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 | #22900 | 200 Tests | 492/520 | 荧光显微镜/荧光酶标仪 |
#22901 | 200 Tests | 520/605 | 荧光显微镜/荧光酶标仪 | |
#22903 | 200 Tests | 658/675 | 荧光显微镜/流式细胞仪 | |
#22904 | 100 Tests | 490/520 | 流式细胞仪 | |
探针 | #16050 | 1 mg | 498/517 | |
#16051 | 1 mg | 498/517 | ||
#16053 | 1 mg | 560/575 |
图1.用Cell Meter 荧光法细胞内总ROS活性测定试剂盒检测HeLa细胞中的ROS。将HeLa细胞以15,000个细胞/ 90 µL /孔在Costar黑色/透明底部96孔板中过夜接种。将细胞未经处理(对照)或在37°C下用1 mM H2O2或100 µM叔ding基氢过氧化物(TBHP)处理30分钟。加入ROS Brite 670工作溶液(100 µL /孔),并在5%CO2和37°C的培养箱中孵育1小时。使用FlexStation(Molecular Devices)以底部读取模式在Ex / Em = 650/675 nm(cut off= 665 nm)处检测荧光信号。 |
图2.在Costar黑色/透明底部96孔板中,用Cell Meter 荧光法细胞内总ROS活性测定试剂盒染色的Hela细胞图像。A:未经处理的对照细胞。 B:细胞在染色前用100 µM氢过氧化叔ding基(TBHP)处理30分钟。 |
图3. ROS Brite 700对PBS缓冲液(pH 7.2)中不同活性氧的荧光响应。用Ex / Em = 670 / 700nm测量荧光强度。 |
各种探针可检测的活性氧种类
活性氧种类 | ROS Brite 570 | ROS Brite 670 | ROS Brite 700 | ROS Brite HDCF | Amplite ROS Green | Amplite ROS Red |
H2O2 | + | + | + | +++ | +++ | +++ |
•OH | ++ | ++ | ++ | + | + | + |
TBHP | + | + | + | + | + | + |
HOCl | - | + | ++ | - | + | - |
O2•- | + | ++ | ++ | - | - | - |
NO | - | - | - | - | - | - |
ONOO- | - | - | - | - | - | - |
货号 | 22902 | 22903 | 16004 | 16053 | 22900 22904 |
22901 |
过氧化氢(H2O2)检测
货号 | 规格 | Ex/Em(nm) | 适用仪器 | 适用样本 | |
Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒 | #11502 | 500 Tests | 648/668 | 荧光酶标仪 | 细胞裂解液 |
#11501 | 500 Tests | 571/584 | 荧光酶标仪 | 细胞裂解液 | |
Cell Meter 细胞内荧光法过氧化氢检测试剂盒 | #11503 | 200 Tests | 498/517 | 荧光酶标仪/荧光显微镜 | 细胞 |
#11504 | 100 Tests | 405/450 | 荧光显微镜 | 细胞 | |
#11505 | 100 Tests | 405/450 | 流式细胞仪 | 细胞 | |
#11506 | 100 Tests | 498/517 | 流式细胞仪 | 细胞 | |
探针 | #15204 | 25 mg | 505/526 | 细胞 | |
#15206 | 10 mg | 507/529 | 细胞 | ||
#15203 | 25 mg | 498/517 | 细胞 |
图1.H2O2浓度由DA单独产生,并具有来自C-syn α 15分钟(浅灰色)、30分钟(深灰色)和60分钟(黑色)的C-终端序列中的各种肽。DA 本身(无肽)随着时间的推移产生越来越多的 H2O2。DA 与 YEMPS 肽的共育增强 H2O2生产,而缺乏肽的 Y127-(EMPSEEGY)和 S129-(NEAYEMP)比 DA 单独或使用 YEMPS 肽产生的 H2O2较少。此外,DA与海氨酸突变肽(YEAPS)的联育在所有条件下产生最高量的H2O2。*p |
图2.使用Cell Meter 细胞内荧光过氧化氢检测试剂盒(Cat#11503)在HeLa细胞中细胞内过氧化氢的荧光图像。在37℃下用(左)或不用(右)100 µM过氧化氢处理HeLa细胞90分钟。 |
图3. 使用Cell Meter 细胞内荧光过氧化氢检测试剂盒(货号:11506)检测Jurkat细胞中的过氧化氢。将Jurkat细胞用OxiVision™Green过氧化物探针染色30分钟,并在37°C下用100 µM过氧化氢处理90分钟。用OxiVision™绿色过氧化物探针染色但未进行过氧化氢处理的细胞用作对照。 |
过氧化物酶类检测
名称 | 货号 | 规格 | Ex/Em(nm) | 仪器 | 适用样本 |
Amplite 荧光法过氧化氢酶检测试剂盒 | #11306 | 200 Tests | 571/584 | 荧光酶标仪 | 细胞裂解液 |
#11552 | 500 Tests | 571/584 | |||
#11553 | 500 Tests | 648/668 | |||
Amplite 荧光法MPO检测试剂盒 | #11301 | 200 Tests | 571/584 | ||
ReadiUse 哺乳动物细胞裂解液 | #20012 | 10 ml | / |
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