MycoLight 快速荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒

MycoLight 快速荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒

MycoLight 快速荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒是美国AAT Bioquest生产的染色细菌的试剂盒，AAT Bioquest的MycoLight 快速荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒提供了一种新颖的一步荧光测定法，用于确定活菌中的革兰氏菌。革兰氏染色是在临床和研究环境中对细菌进行分类的重要且广泛使用的方法。原始方法涉及很多步骤，例如热固定，两步染色方案，酒精提取和复染。这些步骤可能会导致不一致的染色。 AAT Bioquest的一站式工具包消除了更多步骤，从而克服了出现的问题。该试剂盒使用了荧光标记的伴刀豆球蛋白A（ConA），这是一种凝集素，可选择性地与暴露于革兰氏阳性细菌表面的N-乙酰氨基葡糖结合。当革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌用荧光标记的ConA共轭物染色时，只有革兰氏阳性菌发出红色荧光。染色的细菌可以通过荧光监测。因为与其他现有染料相比，我们试剂盒中使用的荧光标记ConA共轭物显示出更高的亮度和光稳定性。

适用仪器

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荧光显微镜
激发：	650nm
发射：	669nm滤波片
推荐孔板：	黑色透明
滤波片：	FITC滤波片组

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细菌样本
2.准备并添加IF647-ConA
3.在黑暗中于室温下将细菌样品与IF647-ConA孵育5-15分钟
4.去除IF647-ConA染色溶液并重悬于测定缓冲液中
5.使用Cy5滤光片组通过荧光显微镜分析样品

 

溶液制备

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1IF647-ConA储备溶液（100X）：
向IF647-ConA小瓶（组分A）中加入100 µL测定缓冲液（组分B），并充分混合。 注意：将储备溶液储存在-20ºC，避免光照，并以较小的等分试样储存，以避免重复的冻融循环。

 

样品示例及操作

1.细菌样品的制备

1.1在适当的培养基中使细菌生长到对数后期。 准备细菌样品，浓度范围为10⁶到10⁸个细胞/ mL。 注意：在波长= 600 nm（OD600）处测量细菌培养物的光密度，以确定细胞数。 对于大肠杆菌培养，OD600 = 1.0等于8 x 10⁸细胞/ mL。

1.2通过以10,000 x g离心5分钟除去培养基，然后将沉淀重新悬浮在测定缓冲液（组分B）中。

 

2.染色方案

2.1向100 µL细菌样品中加入1 µL IF647-ConA储备溶液（100X）。

2.2充分混合，然后在室温下于黑暗中孵育5-15分钟。

2.3以10,000 x g离心5分钟，然后除去IF647-ConA染色溶液。

2.4重悬于100 µL分析缓冲液（组分B）中。

2.5使用荧光显微镜通过Cy5（Ex / Em = 650/669 nm）通道监控细菌的荧光。 注意：该协议仅提供指导，应根据不同的细菌菌株或其他特定需求进行优化。 如果观察到更高的背景，则可以在成像之前添加一个可选的检测缓冲液（组分B）洗涤步骤。

 

参考文献

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Bacteriocins of Gram-positive bacteria having activity spectra extending beyond closely-related species
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Journal: Benef Microbes (2019): 1-14

Butenolide, a Marine-Derived Broad-Spectrum Antibiofilm Agent Against Both Gram-Positive and Gram-Negative Pathogenic Bacteria
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Design and synthesis of biaryloxazolidinone derivatives containing a rhodanine or thiohydantoin moiety as novel antibacterial agents against Gram-positive bacteria
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Design, Synthesis and Biological Evaluation of Novel DNA Gyrase-Inhibiting Spiropyrimidinetriones as Potent Antibiotics for Treatment of Infections Caused by Multidrug-Resistant Gram-Positive Bacteria
Authors: C. Shi
Journal: J Med Chem (2019): se name="22415.enl" path="C:\Website\References\R Files\22415.enl">22415.enlEndNote9917Shi, C.Zhang, Y.Wang, T.Lu, W.Zhang, S.Guo, B.Chen, Q.Luo, C.Zhou, X. L.Yang, Y.Design, Synthesis and Biological Evaluation of Novel DNA Gyrase-Inhibiting Spiropyrimidi

Discovery of small molecule antibiotics against a unique tRNA-mediated regulation of transcription in Gram-positive bacteria
Authors: K. M. Frohlich
Journal: ChemMedChem (2019): se name="22415.enl" path="C:\Website\References\R Files\22415.enl">22415.enlEndNote8817Frohlich, K. M.Weintraub, S.Bell, J. T.Todd, G. C.Vare, V. Y.Schneider, R.Kloos, Z. A.Tabe, E. S.Cantara, W. A.Stark, C.Onwuanaibe, U.Duffy, B. C.Basanta-Sanchez, M.Kit

Highly-branched poly(N-isopropyl acrylamide) functionalised with pendant Nile red and chain end vancomycin for the detection of Gram-positive bacteria
Authors: T. Swift
Journal: Acta Biomater (2019): se name="22415.enl" path="C:\Website\References\R Files\22415.enl">22415.enlEndNote7717Swift, T.Katsikogianni, M.Hoskins, R.Teratarantorn, P.Douglas, I.MacNeil, S.Rimmer, S.Polymer and Biomaterials Chemistry Laboratories, School of Chemistry and Bioscienc

 

微生物培养

分类：纯培养（已纯化的单一菌种进行培养和利用）、混合培养（混合菌种或自然样品（如土壤）中的微生物进行培养），然后根据培养基上所生长微生物的种类和数量，可在一定程度上估算土壤中微生物的多样性与数量。

 

品牌	产品名称	货号	规格	价格
AAT	Cell Meter 细菌活力检测试剂盒	22400	200Tests	3540
AAT	MycoLight 比率细菌膜电位试剂盒 红色/绿色荧光	22401	200Tests	3540
AAT	MycoLight 荧光CTC活细菌定量试剂盒	22405	100Tests	3540
AAT	MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒	22407	100Tests	3540
AAT	MycoLight 活细菌荧光成像试剂盒	22409	100Tests	3540
AAT	MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒	22411	100Tests	4740
AAT	MycoLight 快速荧光细菌革兰染色试剂盒	22413	100Tests	4740
AAT	MycoLight 快速荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒	22415	100Tests	3540