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PCR纯化试剂盒/DNA纯化试
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PCR纯化试剂盒(PCR Clean Up Kit),也称DNA纯化试剂盒(DNA Purification Kit)是一种用于PCR产物纯化或从多种DNA反应体系中纯化DNA的试剂盒。适用于PCR反应后去除引物、酶、矿物油、甘油、盐等杂质;也同样适用于酶切、连接、磷酸化、补平或切平、随机引物等反应后的DNA纯化。纯化所得DNA可直接用于酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等后续操作。本试剂盒适用于纯化100bp-10kb DNA,长至30个碱基的引物均可被完全去除。本试剂盒采用了一种新型的DNA纯化柱。在特定条件下,使DNA能在离心过柱的瞬间,结合到DNA纯化柱上,在一定条件下又能将DNA充分洗脱,从而实现DNA的快速纯化。无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,12个样品只需不足15分钟即可完成。 每个DNA纯化柱可以结合的DNA量的上限约为15微克。DNA回收效率约为90%。接近100bp或10kb的DNA片段回收效率要略低一些,大于10kb的DNA回收效率迅速下降。另外如果样品中DNA含量特别低也会导致回收效率下降。本试剂盒足够纯化50个平均体积不超过400微升的DNA样品。包装清单:
保存条件:室温保存,一年有效。注意事项:第一次使用前在溶液II(洗涤液)中加入39ml无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。溶液I对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:1. 加入等体积的溶液I,混匀。例如DNA样品体积为100微升,则加100微升溶液I。如果等体积混合后体积较大,可以把部分样品加入到纯化柱内,经离心处理后,再加入剩余的样品继续处理。矿物油对于本试剂盒没有干扰。2. 把与溶液I等体积混匀的样品加入到DNA纯化柱内,室温放置1分钟。通常室温放置数秒待溶液浸润到纯化柱中即可。3. 最高速(16,000g,约12,000-14,000rmp左右)离心1分钟,倒弃收集管内的液体。注意:这一步尽量要达到16,000g,较低离心速度会导致回收效率下降。4. 在DNA纯化柱内加入700微升溶液II,室温放置1分钟。5. 最高速离心1分钟,洗去杂质。倒弃收集管内的液体。6. 再加入500微升溶液II,最高速离心1分钟,进一步洗去杂质。倒弃收集管内的液体。7. 最高速再离心1分钟,除去残留液体并让残留的乙醇充分挥发。8. 将DNA纯化柱置于1.5毫升离心管上,加入50微升溶液III至管内柱面上,放置1分钟。用1.5ml离心管作为收集管。溶液III需要直接加至管内柱面中央,使液体被纯化柱吸收。如果不慎将溶液III沾在管壁上,一定要震动管子,使液体滑落到管底,以便被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或Milli-Q级纯水替代溶液III,但是水的pH值应不小于6.5。如需得到较高浓度的DNA,可以只加20-30微升溶液III,但产量会略有下降。放置较长时间例如3-5分钟,会对提高产量略有帮助。9. 最高速离心1分钟,所得液体即为高纯度DNA。
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